ASTM E2186-02a(2016)
Guía estándar para determinar el daño monocatenario del ADN en células eucariotas mediante el ensayo Comet

Estándar No.

ASTM E2186-02a(2016)

Fecha de publicación

2002

Organización

American Society for Testing and Materials (ASTM)

Ultima versión

ASTM E2186-02a(2016)

Alcance

5.1 Un resultado común del estrés celular es un aumento en el daño al ADN. El daño al ADN puede manifestarse en forma de alteraciones de bases, formación de aductos, roturas de cadenas y enlaces cruzados (19). Las roturas de hebras pueden introducirse de muchas maneras, directamente mediante compuestos genotóxicos, mediante la inducción de apoptosis o necrosis, secundariamente mediante la interacción con radicales de oxígeno u otros intermediarios reactivos, o como consecuencia de enzimas reparadoras de escisión (20-22). Además de un vínculo con el cáncer, los estudios han demostrado que los aumentos en el daño del ADN celular preceden o se corresponden con un crecimiento reducido, un desarrollo anormal y una supervivencia reducida de adultos, embriones y larvas (16, 23, 24). 5.1.1 El ensayo Comet se puede utilizar fácilmente para recopilar datos sobre la rotura de la cadena de ADN (9, 25, 26). Es un método sencillo, rápido y sensible que permite comparar el daño de las cadenas de ADN en diferentes poblaciones celulares. Como se presenta en esta guía, el ensayo facilita la detección de roturas de hebra única de ADN y sitios lábiles alcalinos en células individuales, y puede determinar su abundancia en relación con las células de control o de referencia (9, 16, 26). El ensayo ofrece una serie de ventajas; Se mide el daño al ADN en células individuales, sólo es necesario tomar muestras de un número extremadamente pequeño de células para realizar el ensayo (<108201;000), el ensayo se puede realizar en prácticamente cualquier tipo de célula eucariota y se ha demostrado en Los estudios comparativos son un método muy sensible para detectar daños en el ADN (2, 27). 5.1.2 Estas son pautas generales. Existen numerosas variantes de procedimiento de este ensayo. La variación utilizada depende del tipo de células que se examinan, los tipos de daño de interés en el ADN y las capacidades de análisis e imágenes del laboratorio que realiza el ensayo. Para visualizar el ADN, se tiñe con un tinte fluorescente, o para el análisis con microscopio óptico el ADN se puede teñir con plata (28). En esta guía sólo se describirán métodos de tinción fluorescente. La determinación microscópica de la migración del ADN se puede realizar a simple vista utilizando un micrómetro ocular o mediante el uso de un software de análisis de imágenes. La puntuación visual se puede realizar utilizando un micrómetro ocular calibrado o categorizando las células en cuatro a cinco clases según el grado de migración (29, 30). Los sistemas de análisis de imágenes se componen de una cámara CCD conectada a un microscopio fluorescente y software y hardware diseñados específicamente para capturar y analizar imágenes de núcleos teñidos con fluorescencia. Usando tal......

ASTM E2186-02a(2016) Documento de referencia

• ASTM E1706 Método de prueba estándar para medir la toxicidad de contaminantes asociados a sedimentos en invertebrados de agua dulce
• ASTM E1847 Práctica estándar para el análisis estadístico de pruebas de toxicidad realizadas según las pautas de ASTM

ASTM E2186-02a(2016) Historia

• 2002 ASTM E2186-02a(2016) Guía estándar para determinar el daño monocatenario del ADN en células eucariotas mediante el ensayo Comet
• 2002 ASTM E2186-02a(2010) Guía estándar para determinar el daño monocatenario del ADN en células eucariotas mediante el ensayo Comet
• 2002 ASTM E2186-02a Guía estándar para determinar el daño monocatenario del ADN en células eucariotas mediante el ensayo Comet
• 2002 ASTM E2186-02 Guía estándar para determinar el daño monocatenario del ADN en células eucariotas mediante el ensayo Comet