ASTM F3294-18
Guía estándar para realizar mediciones cuantitativas de la intensidad de la fluorescencia en ensayos celulares con microscopía de epifluorescencia de campo amplio

Estándar No.

ASTM F3294-18

Fecha de publicación

2018

Organización

American Society for Testing and Materials (ASTM)

Ultima versión

ASTM F3294-18

Alcance

1.1 Este documento de orientación ha sido desarrollado para facilitar la recopilación de imágenes de microscopía con un microscopio de epifluorescencia que permite extraer mediciones cuantitativas de fluorescencia de las imágenes. El documento está diseñado para biólogos celulares que suelen utilizar técnicas de tinción fluorescente para visualizar componentes de un sistema experimental basado en células. La comparación cuantitativa de los datos de intensidad disponibles en estas imágenes solo es posible si las imágenes son cuantitativas y se basan en un diseño experimental sólido y en el funcionamiento adecuado del detector de matriz digital, como un dispositivo de carga acoplada (CCD) o un semiconductor científico complementario de óxido metálico (sCMOS). ) o cámara similar. Se consideran los problemas relacionados con la configuración del software del controlador y del detector de matriz, incluida la recopilación de imágenes de recuento oscuro para estimar el desplazamiento, la corrección de campo plano, la corrección de fondo, la evaluación comparativa de la lámpara de excitación y la óptica de recolección fluorescente. 1.2 Este documento se desarrolla en torno a la microscopía de epifluorescencia, pero es probable que muchas de las cuestiones analizadas aquí sean aplicables a la obtención de imágenes cuantitativas en otros sistemas de microscopía de fluorescencia, como la microscopía confocal de fluorescencia. Esta guía se desarrolló en torno a imágenes de microscopía de fluorescencia de un solo color o imágenes multicolores donde la fluorescencia medida está espectralmente bien separada. 1.3 La intensidad de la fluorescencia es una medida relativa y no tiene en sí misma una unidad SI asociada. Este documento analiza cuestiones de metrología relacionadas con mediciones relativas y diseños experimentales que pueden ser necesarios para garantizar que las mediciones de fluorescencia cuantitativa sean comparables después de cambiar las configuraciones del microscopio, la muestra y la lámpara. 1.4 Esta norma no pretende abordar todos los problemas de seguridad, si los hay, asociados con su uso. Es responsabilidad del usuario de esta norma establecer prácticas apropiadas de seguridad, salud y medio ambiente y determinar la aplicabilidad de las limitaciones reglamentarias antes de su uso. 1.5 Esta norma internacional fue desarrollada de acuerdo con los principios internacionalmente reconocidos sobre estandarización establecidos en la Decisión sobre Principios para el Desarrollo de Normas, Guías y Recomendaciones Internacionales emitida por el Comité de Obstáculos Técnicos al Comercio (OTC) de la Organización Mundial del Comercio.

ASTM F3294-18 Documento de referencia

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• ISO 13653 Óptica y fotónica. Métodos generales de prueba óptica. Medición de la irradiancia relativa en el campo de la imagen.*， 2019-05-14 Actualizar

ASTM F3294-18 Historia

• 2018 ASTM F3294-18 Guía estándar para realizar mediciones cuantitativas de la intensidad de la fluorescencia en ensayos celulares con microscopía de epifluorescencia de campo amplio