ASTM F2998-14
Guía para utilizar microscopía de fluorescencia para cuantificar el área de extensión de células fijas

Estándar No.

ASTM F2998-14

Fecha de publicación

2014

Organización

American Society for Testing and Materials (ASTM)

Ultima versión

ASTM F2998-14

Alcance

5.1 En condiciones bien controladas, la evaluación cuantitativa de las características morfológicas de una población celular se puede utilizar para identificar cambios en el comportamiento o estado celular. Se pueden esperar cambios en la morfología celular cuando, por ejemplo, hay una respuesta a cambios en la organización del citoesqueleto celular (1), una respuesta de las células a compuestos tóxicos, cambios en el estado de diferenciación y cambios en las propiedades de adhesión de las células a un sustrato, ya sea por vías de señalización basadas en matriz extracelular (ECM) inducidas química o mecánicamente (2, 3). Normalmente, las poblaciones de células exhiben una variedad de morfologías incluso cuando las células son genéticamente idénticas y se encuentran en un entorno homogéneo (4). Esta variación biológica en la respuesta celular se debe tanto a variaciones del ciclo celular como a la estocasticidad en las reacciones celulares que controlan la adhesión y la propagación en las células. Mediante el uso de mediciones basadas en microscopía célula por célula y procedimientos de muestreo estadístico apropiados, se puede medir la distribución de las morfologías celulares, como el área de propagación celular por célula. Esta distribución es muy característica de la cultura y las condiciones que se examinan. 5.2 Es importante señalar que el uso de esta técnica para células sobre o dentro de materiales de soporte tridimensionales puede complicar la interpretación de los datos. Las transformaciones topográficas de las células en un material tridimensional pueden requerir imágenes volumétricas completas y no solo imágenes de fluorescencia de campo amplio como se describe aquí. 5.3 los siguientes son varios ejemplos de cómo se puede utilizar esta medición en un laboratorio:&#— 5.3.1 Cuantificar la respuesta celular a un biomaterial—La medición del área de propagación celular se puede utilizar para caracterizar la respuesta de las células a los biomateriales. Por ejemplo, la propagación de la mayoría de los tipos de células es extremadamente sensible a la rigidez del sustrato del cultivo (5), (6). Es importante señalar que la respuesta celular a una ECM puede depender de la preparación de la matriz. Por ejemplo, las mismas proteínas ECM preparadas en un recubrimiento de superficie fibrilar o no fibrilar pueden dar como resultado una respuesta morfológica diferente. 5.3.2 Métrica de control de calidad para condiciones generales de cultivo celular—El área de propagación celular puede ser un métrica útil para monitorear un cambio en las condiciones del cultivo celular (es decir, debido a un componente sérico, pH, número de pases, confluencia, etc.). La morfología celular a menudo se altera cuando las células están estresadas y pasan por procesos relacionados con la muerte celular (es decir, apotoposis). 5.3.3 Métrica de control de calidad para la fabricación de biomateriales— Las mediciones del área de dispersión celular pueden ser útiles para generar especificaciones para un biomaterial. Estas especificaciones pueden estipular cómo responde una línea celular particular a un biomaterial fabricado. 5.3.4 Métrica de control de calidad para la integridad de líneas celulares y evaluación comparativa de morfología—Lo ideal es que la característica morfológica de una línea celular cultivada en condiciones específicas sea la misma a lo largo del tiempo y en diferentes laboratorios. Por lo tanto, las mediciones del área de propagación celular pueden ser útiles para validar que no se han producido cambios significativos en los cultivos celulares. Esta medición proporciona un punto de referencia que es útil para establecer el estado actual del cultivo celular y una métrica que se puede representar con mayor confianza para comparaciones de mediciones celulares dentro y entre laboratorios (7......

ASTM F2998-14 Documento de referencia

• ASTM E1488 Guía estándar para procedimientos estadísticos que se utilizarán en el desarrollo y aplicación de métodos de prueba ASTM
• ASTM F2150 Guía estándar para la caracterización y prueba de andamios de biomateriales utilizados en medicina regenerativa y productos médicos de ingeniería de tejidos

ASTM F2998-14 Historia

• 2014 ASTM F2998-14 Guía para utilizar microscopía de fluorescencia para cuantificar el área de extensión de células fijas