ASTM F2149-01(2007) Método de prueba estándar para análisis automatizados de células: el método de zona de detección eléctrica para enumerar y dimensionar suspensiones de células individuales
Este ensayo se utiliza en laboratorios de cultivo de tejidos universitarios, investigaciones gubernamentales y laboratorios hospitalarios, biomédicos y farmacéuticos para automatizar el recuento y el tamaño de las células. Esta instrumentación proporciona resultados muy rápidos, exactos y precisos para cualquier instalación de cultivo de tejidos. Además, como se ha señalado, dado que el tamaño de las células que analizará el instrumento los establece el usuario, los análisis se pueden realizar en prácticamente cualquier especie de célula y tipo de célula; no se limita a células humanas o células sanguíneas. La metodología de la zona de detección eléctrica se introdujo a mediados de la década de 1950 (9). Desde entonces, se han realizado mejoras sustanciales que han mejorado la facilidad de uso del operador. Entre ellas se encuentran la eliminación del manómetro de mercurio, su tamaño reducido, una mayor automatización y la disponibilidad de programas informáticos estadísticos integrales. Esta instrumentación ofrece un resultado rápido en contraste con el recuento manual de células utilizando la cámara de recuento estándar, el hemocitómetro. Se sabe que la cámara de recuento tiene un error del 10 al 30 %, además de consumir mucho tiempo (10). Además, al contar y dimensionar los hepatocitos porcinos, Stegemann et al concluyeron que el método automatizado de zona de detección eléctrica proporcionaba una exactitud, precisión y velocidad significativamente mayores, tanto para el recuento como para el tamaño, en comparación con el método microscópico convencional o el método basado en la masa celular. (7).1.1 Este método de prueba, siempre que se comprendan las limitaciones, cubre un procedimiento tanto para la enumeración como para la medición de la distribución de tamaño de la mayoría de los tipos de células. La instrumentación permite configuraciones de tamaño de celda seleccionables por el usuario, por lo tanto, este método de prueba no se limita a tipos de celda específicos. El método es apropiado tanto para suspensiones como para cultivos celulares adherentes (). Este es un método de laboratorio cuantitativo que no está diseñado para uso en línea o sobre el terreno. Los resultados pueden informarse como número de células por mililitro o número total de células por volumen de suspensión celular analizada. Tanto el recuento como la distribución del tamaño pueden expresarse en micras de diámetro o volumen celular, femtolitros. 1.2 Las células comúnmente utilizadas en productos médicos de ingeniería tisular () se analizan de forma rutinaria. Algunos ejemplos son los condrocitos (), los fibroblastos () y los queratinocitos (). Szabo et al utilizaron el método tanto para medir el número como el volumen de los islotes pancreáticos (). Además, se utilizó instrumentación que utiliza la tecnología de zona de detección eléctrica para análisis de recuento y distribución de tamaño de hepatocitos porcinos colocados en sistemas extracorpóreos de asistencia hepática con cartuchos de fibra hueca. En este estudio (), y otros (,), el método automatizado de la zona de detección eléctrica fue claramente validado por su exactitud y precisión superiores en comparación con el método manual convencional, el recuento visual de células bajo un microscopio utilizando un hemocitómetro. Esta validación se ha demostrado en una amplia variedad de tipos de células. Además, el procedimiento automatizado es rápido, robusto y rentable; también minimiza la variabilidad entre operadores inherente a las técnicas manuales.1.3 Esta instrumentación es fabricada por una variedad de empresas; sin embargo, el principio utilizado en todos es la impedancia eléctrica. Este método de prueba, para recuento y dimensionamiento de células, se basa en la detección y medición de cambios en la resistencia eléctrica producida por una célula, suspendida en un líquido conductor, que atraviesa una pequeña abertura (ver ()). Cuando las células se suspenden en un líquido conductor, como por ejemplo una solución salina tamponada con fosfato, funcionan como aisladores discretos. Cuando la suspensión de células se pasa a través de una pequeña abertura cilíndrica, el paso de cada celda cambia la impedancia del camino eléctrico entre dos electrodos sumergidos ubicados a cada lado de la abertura. ......
ASTM F2149-01(2007) Historia
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