ASTM F2149-01 Método de prueba estándar para análisis automatizados de células 8212; el método de zona de detección eléctrica para enumerar y dimensionar suspensiones de células individuales
1.1 Este método de prueba, siempre que se comprendan las limitaciones, cubre un procedimiento tanto para la enumeración como para la medición de la distribución de tamaños de la mayoría de los tipos de células. La instrumentación permite configuraciones de tamaño de celda seleccionables por el usuario, por lo tanto, este método de prueba no se limita a tipos de celda específicos. El método es apropiado tanto para cultivos celulares en suspensión como adherentes (1). Este es un método de laboratorio cuantitativo que no está diseñado para uso en línea o sobre el terreno. Los resultados pueden informarse como número de células por mililitro o número total de células por volumen de suspensión celular analizada. Tanto el recuento como la distribución del tamaño pueden expresarse en micras de diámetro o volumen celular, femtolitros. 1.2 Las células comúnmente utilizadas en productos médicos de ingeniería tisular (2) se analizan de forma rutinaria. Algunos ejemplos son los condrocitos (3), los fibroblastos (4) y los queratinocitos (5). Szabo et al utilizaron el método tanto para medir el número como el volumen de los islotes pancreáticos (6). Además, se utilizó instrumentación que utiliza la tecnología de zona de detección eléctrica para análisis de recuento y distribución de tamaño de hepatocitos porcinos colocados en sistemas extracorpóreos de asistencia hepática con cartuchos de fibra hueca. En este estudio (7) y otros (6, 8), el método automatizado de la zona de detección eléctrica fue claramente validado por su exactitud y precisión superiores en comparación con el método manual convencional, el recuento visual de células bajo un microscopio utilizando un hemocitómetro. Esta validación se ha demostrado en una amplia variedad de tipos de células. Además, el procedimiento automatizado es rápido, robusto y rentable; también minimiza la variabilidad entre operadores inherente a las técnicas manuales.1.3 Esta instrumentación es fabricada por una variedad de empresas; sin embargo, el principio utilizado en todos es la impedancia eléctrica. Este método de prueba, para recuento y dimensionamiento de células, se basa en la detección y medición de cambios en la resistencia eléctrica producida por una célula, suspendida en un líquido conductor, que atraviesa una pequeña abertura (ver (Fig. 1)). Cuando las células se suspenden en un líquido conductor, como por ejemplo una solución salina tamponada con fosfato, funcionan como aisladores discretos. Cuando la suspensión de células se pasa a través de una pequeña abertura cilíndrica, el paso de cada celda cambia la impedancia del camino eléctrico entre dos electrodos sumergidos ubicados a cada lado de la abertura. Un impulso eléctrico, adecuado tanto para contar como para dimensionar, resulta del paso de cada célula a través de la abertura. El camino a través de la apertura, en el que se detecta la célula, se conoce como "zona de detección electrónica". Este método de prueba permite el recuento selectivo de células dentro de rangos de distribución de tamaño muy estrechos mediante la selección electrónica de los pulsos generados. Si bien el número de pulsos indica el recuento de células, la amplitud del pulso eléctrico producido depende del volumen de la célula. La resistencia base entre los electrodos se debe a la resistencia del líquido conductor dentro de los límites de la abertura. La presencia de células dentro de la "zona de detección electrónica" aumenta la resistencia de la vía conductora que depende del volumen de la célula. Los análisis del comportamiento de las células dentro de la apertura demuestran que la altura del pulso producido por la célula es el parámetro que más se acerca a la proporcionalidad con el volumen de la célula. 1.4 Las limitaciones se analizan a continuación: 1.4.1 Coincidencia8212; Ocasionalmente, más de una una sola célula atraviesa la apertura simultáneamente. Sólo se genera un único impulso de mayor tamaño, a diferencia de dos impulsos individuales. El resultado es un recuento de células más bajo y una medición de volumen de células más alta. La frecuencia de coincidencia es una función estadísticamente predecible de la concentración celular que el instrumento corrige. Esto se llama corrección de coincidencia (8). Este fenómeno se puede minimizar, asegurando así una mayor precisión de los resultados, mediante el uso de celdas relativamente bajas.
ASTM F2149-01 Historia
2016ASTM F2149-16 Método de prueba estándar para análisis automatizados de células: método de zona de detección eléctrica para enumerar y dimensionar suspensiones de células individuales
2001ASTM F2149-01(2007) Método de prueba estándar para análisis automatizados de células: el método de zona de detección eléctrica para enumerar y dimensionar suspensiones de células individuales
2001ASTM F2149-01 Método de prueba estándar para análisis automatizados de células 8212; el método de zona de detección eléctrica para enumerar y dimensionar suspensiones de células individuales