ASTM F3088-14
Método de prueba estándar para el uso de un método de centrifugación para cuantificar/estudiar las interacciones adhesivas del material celular

Estándar No.

ASTM F3088-14

Fecha de publicación

2014

Organización

American Society for Testing and Materials (ASTM)

Estado

Remplazado por

ASTM F3088-22

Ultima versión

ASTM F3088-22

Alcance

4.1 Este método de prueba describe un método de adhesión celular que se puede utilizar para proporcionar un porcentaje de desprendimiento en un RCF determinado para células que se han adherido a un sustrato, generalmente durante un período corto de tiempo. La información generada por este método de prueba se puede utilizar para obtener una medición semicuantitativa de la adhesión de las células a un sustrato sin recubrimiento o prerrevestido, en comparación con un tipo de célula de referencia (adherente) en el mismo sustrato. Como se describe en Reyes y García (2003), se recomienda utilizar el punto del 50 % para la concentración de ligando o para RCF para obtener la medición más sólida de la fuerza de adhesión. La adhesión puede variar debido a cambios en el fenotipo de las células o como resultado de propiedades específicas de la superficie. El sustrato puede incluir poliestireno tratado con cultivo de tejidos, biomateriales o superficies bioactivas. Si el sustrato es un hidrogel, se debe tener cuidado para evitar una falla cohesiva en el hidrogel (es decir, las células desprendidas han arrancado fragmentos de gel). El recubrimiento puede consistir en (pero no se limita a) lo siguiente: biomateriales naturales o sintéticos, hidrogeles, componentes de la matriz extracelular (ECM), ligandos, moléculas de adhesión o bioactivas, genes o productos génicos. La concentración celular también es crítica, ya que el uso de una concentración demasiado alta de células puede provocar que las células se desprendan como una lámina, en lugar de como células individuales. Este enfoque de centrifugación, una vez validado, puede ser aplicable para el control de calidad (QC) y el desarrollo de productos. Sin embargo, hasta que el método se correlacione con otras medidas de adhesión celular, el método actual debe ejecutarse en paralelo con otras medidas conocidas de adhesión celular. 4.2 Este método de prueba no cubre métodos de prueba para cuantificar cambios en la expresión genética o cambios en biomarcadores, identificados mediante inmunotinción. Este método de prueba tampoco cubre técnicas de análisis de imágenes cuantitativas. En algunos casos, el cambio en las propiedades adhesivas puede reflejarse en el grado de diferenciación o desdiferenciación de las células. Sin embargo, vale la pena señalar que las interacciones adhesivas no reflejan necesariamente el estado de diferenciación de un tipo de célula particular, aunque en muchos casos sí lo hacen. (Consulte X1.3 para conocer la aplicación a la adhesión de condrocitos). 1.1 Este método de prueba cubre un ensayo de adhesión celular por centrifugación que se puede utilizar para detectar cambios en las características adhesivas de las células con pases o tratamientos. Este enfoque mide la fuerza necesaria para separar las células de un sustrato. La adherencia, entre muchas variables, puede variar debido a cambios en el fenotipo de las células. 1.2 Este método de prueba no cubre métodos para verificar la uniformidad del recubrimiento de superficies, ni cubre métodos para caracterizar superficies. 1.3 Las células pueden incluir células adultas, progenitoras o madre de cualquier especie. Los tipos de células pueden incluir condrocitos, fibroblastos, osteoblastos, células de los islotes u otros tipos de células adherentes relevantes. 1.4 Este método de prueba no cubre métodos para aislar o recolectar células. Este método de prueba no cubre métodos de prueba para cuantificar cambios en la expresión genética o cambios en el tipo o concentración de biomarcadores, identificados mediante inmunotinción. Este método de prueba tampoco cubre técnicas de análisis de imágenes cuantitativas. 1.5 Esta norma no pretende abordar todos los problemas de seguridad, si los hay, asociados con su uso. Es responsabilidad del usuario de esta norma establecer prácticas apropiadas de seguridad y salud y determinar la aplicabilidad de las limitaciones reglamentarias antes de su uso.

ASTM F3088-14 Documento de referencia

• ASTM F2603 Guía estándar para interpretar imágenes de andamios de tejido polimérico
• ASTM F2664 Guía estándar para evaluar la unión de células a superficies de biomateriales mediante métodos físicos
• ASTM F2739 Guía estándar para cuantificar la viabilidad celular y atributos relacionados dentro de estructuras de biomateriales
• ASTM F2944 Práctica estándar para ensayos automatizados de unidades formadoras de colonias (CFU): método de análisis y adquisición de imágenes para enumerar y caracterizar células y colonias en cultivo

ASTM F3088-14 Historia

• 2022 ASTM F3088-22 Práctica estándar para el uso de un método de centrifugación para cuantificar/estudiar las interacciones adhesivas entre células y material
• 2014 ASTM F3088-14 Método de prueba estándar para el uso de un método de centrifugación para cuantificar/estudiar las interacciones adhesivas del material celular