ASTM F2944-12
Método de prueba estándar para ensayos automatizados de unidades formadoras de colonias (UFC); método de análisis y adquisición de imágenes para enumerar y caracterizar células y colonias en cultivo

Estándar No.

ASTM F2944-12

Fecha de publicación

2012

Organización

American Society for Testing and Materials (ASTM)

Estado

Remplazado por

ASTM F2944-20

Ultima versión

ASTM F2944-20

Alcance

El ensayo manual dependiente del observador8212; La cuantificación manual de cultivos de células y UFC basada en criterios o juicios dependientes del observador es una tarea extremadamente tediosa y que requiere mucho tiempo y se ve significativamente afectada por el sesgo del usuario. Para mantener la coherencia en la adquisición de datos, los estudios de desarrollo y descubrimiento de fármacos y farmacológicos que utilizan ensayos basados en células y colonias a menudo requieren que un solo observador cuente células y colonias en cientos y potencialmente miles de cultivos. Debido a la fatiga del observador, tanto la precisión como la reproducibilidad de la cuantificación se ven gravemente afectadas (5). Cuando se emplean varios observadores, se reduce la fatiga del observador, pero la precisión y reproducibilidad de la enumeración de células y colonias aún se ven significativamente comprometidas debido al sesgo del observador y a la importante variabilidad intra e interobservador (4, 13). El uso del análisis de imágenes automatizado cuantitativo proporciona datos tanto para el número de colonias como para el número de células en cada colonia. Estos datos también se pueden utilizar para calcular la media de células por colonia. Los métodos tradicionales para la cuantificación de colonias mediante recuento manual junto con un ensayo de número de células (por ejemplo, ADN o mitocondrial) siguen siendo un método viable que se puede utilizar para calcular el número medio de células por colonia. Estos métodos tradicionales tienen la ventaja de que actualmente requieren menos mano de obra y menos exigencias técnicas (8, 9). Sin embargo, los ensayos tradicionales no proporcionan información a nivel de colonia (por ejemplo, variación y asimetría), ni proporcionan un medio para excluir las células que no forman parte de una colonia del cálculo del tamaño medio de la colonia. Como resultado, la medición del número medio de células por colonia que se obtiene con estos métodos alternativos puede diferir cuando un número sustancial de células en una muestra no está asociado con la formación de colonias. Al emplear hardware y software de adquisición, procesamiento y análisis de imágenes de última generación, se logra un sistema de análisis exacto, preciso, robusto y automatizado. Áreas de aplicación8212;La enumeración de células y colonias (ensayo UFC) se está volviendo particularmente importante en la fabricación, el aseguramiento/control de calidad (QA/QC) y el desarrollo de criterios de liberación de potencia y seguridad del producto para la medicina regenerativa basada en células y la terapia celular. En 2006, la Administración de Alimentos y Medicamentos (FDA) publicó un documento guía que presagiaba la importancia del ensayo de colonias para establecer una pista de auditoría para los pasos antes mencionados del desarrollo de productos en esta industria (10). Corroborando este documento, la FDA publicó un documento de orientación adicional en 2009 proponiendo la posible importancia del ensayo de colonias con respecto a la potencia funcional de las células madre derivadas de la sangre de la placenta y del cordón umbilical en medicina regenerativa y aplicaciones terapéuticas (11). Dado que la validación de fuentes celulares y el control de calidad y control de calidad representan aproximadamente el 50 % del costo de fabricación de las terapias celulares (12), desarrollar un medio preciso, sólido y rentable para enumerar células y colonias es vital para la sostenibilidad y el crecimiento de esta industria. Las amplias áreas de uso para el análisis automatizado de ensayos de unidades formadoras de colonias incluyen: Caracterización de una fuente celular correlacionando el potencial biológico y la potencia funcional con la formación de UFC. Caracterización del efecto de las etapas de procesamiento o manipulación biológica o física (por ejemplo, estímulos) sobre las células o la formación de colonias. Caracterización de células y colonias mediante marcadores específicos fluorescentes y no fluorescentes (diferenciación). Extrapolación de la potencia biológica (por ejemplo, diferenciación, proliferativa, etc.) de una muestra más grande...

ASTM F2944-12 Historia

• 2020 ASTM F2944-20 Práctica estándar para ensayos automatizados de unidades formadoras de colonias (CFU): método de análisis y adquisición de imágenes para enumerar y caracterizar células y colonias en cultivo
• 2012 ASTM F2944-12 Método de prueba estándar para ensayos automatizados de unidades formadoras de colonias (UFC); método de análisis y adquisición de imágenes para enumerar y caracterizar células y colonias en cultivo