ASTM F2131-02 Método de prueba estándar para la actividad biológica in vitro de la proteína morfogenética ósea 2 recombinante (rhBMP-2) utilizando la línea celular estromal de ratón W-20
1.1 Este método de prueba describe el método utilizado y el cálculo de los resultados para la determinación de la actividad biológica in vitro de rhBMP-2 utilizando la línea celular estromal de ratón W-20 clon 17 (W-20-17). Este clon se derivó de células estromales de médula ósea de la cepa de ratón W++.1.2 Este método de prueba (ensayo) ha sido calificado y validado según las pautas de validación de ensayos del Comité Internacional de Armonización (con excepción de la precisión entre laboratorios) para la evaluación de la actividad biológica de rhBMP-2. También se ha estudiado la relevancia de este método de prueba in vitro para la formación ósea in vivo. La respuesta medida en el bioensayo W-20, inducción de fosfatasa alcalina, se ha correlacionado con la capacidad de formación de hueso ectópico de rhBMP-2 en la prueba de uso in vivo (UT). Como herramienta para comparar las actividades se utilizó rhBMP-2, que fue parcial o totalmente inactivada mediante oxidación dirigida con ácido peracético de las dos metioninas. Se demostró que la oxidación de rhBMP-2 con ácido peracético estaba dirigida específicamente a las metioninas mediante mapeo de péptidos y espectrometría de masas. Estas metioninas residen en una bolsa de unión al receptor hidrofóbico en rhBMP-2. Las muestras oxidadas se compararon junto con un control de incubación y un control nativo. Las muestras oxidadas al 62, 87, 98 y 100 % tenían niveles de actividad del W-20 de 62, 20, 7 y 5 %, respectivamente. Las muestras de incubación y control nativo mantuvieron una actividad del 100 %. Las muestras se evaluaron en la UT y mostraron un efecto similar de inactivación sobre la actividad formadora de hueso. Las muestras con 62 % y 20 % de actividad en el ensayo W-20 demostraron niveles reducidos de formación ósea, similar en nivel a la reducción de la actividad específica de W-20, en relación con el control de incubación. Se formó poco o ningún hueso ectópico en los implantes de rhBMP-2 con 7 y 5 % de actividad.1.3 Por lo tanto, las modificaciones en la molécula de rhBMP-2 en el sitio de unión al receptor disminuyen la actividad tanto en los ensayos W-20 como en UT. Estos datos sugieren que un único dominio de unión al receptor en rhBMP-2 es responsable de la actividad tanto in vitro como in vivo y que el bioensayo W-20 es un predictor relevante de la actividad formadora de hueso de rhBMP-2.1.4 Los valores indicados en Las unidades SI deben considerarse estándar. 1.5 Esta norma no pretende abordar todos los problemas de seguridad, si los hay, asociados con su uso. Es responsabilidad del usuario de esta norma establecer prácticas apropiadas de seguridad y salud y determinar la aplicabilidad de las limitaciones reglamentarias antes de su uso.
ASTM F2131-02 Historia
2021ASTM F2131-21 Método de prueba estándar para la actividad biológica in vitro de la proteína morfogenética ósea 2 recombinante (rhBMP-2) utilizando la línea celular estromal de ratón W-20
2002ASTM F2131-02(2012) Método de prueba estándar para la actividad biológica in vitro de la proteína morfogenética ósea 2 recombinante (rhBMP-2) utilizando la línea celular estromal de ratón W-20
2002ASTM F2131-02(2007)e1 Método de prueba estándar para la actividad biológica in vitro de la proteína morfogenética ósea 2 recombinante (rhBMP-2) utilizando la línea celular estromal de ratón W-20
2002ASTM F2131-02(2007) Método de prueba estándar para la actividad biológica in vitro de la proteína morfogenética ósea 2 recombinante (rhBMP-2) utilizando la línea celular estromal de ratón W-20
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