La presencia de medio de crecimiento celular complica un análisis directo de células con SIMS. Los intentos de eliminar el medio nutritivo dan como resultado la exposición de las células a reactivos no fisiológicos que también pueden alterar su composición química. Este obstáculo se supera utilizando un método de fractura por congelación en sándwich (1). Este método criogénico ha proporcionado una forma única de tomar muestras de células individuales en su estado nativo para el análisis SIMS. El procedimiento descrito aquí se ha utilizado con éxito para obtener imágenes del transporte de iones Na+ y K+ (3), alteraciones del calcio en células estimuladas (4,5) y localización de fármacos terapéuticos y moléculas marcadas isotópicamente en células individuales (6). Se ha comprobado el efecto de la matriz SIMS en las células liofilizadas preparadas según este método (7). La cuantificación de imágenes de iones también se ha logrado en este tipo de muestra (8). El procedimiento descrito aquí es adecuado para una amplia variedad de cultivos celulares y proporciona una manera de estudiar la respuesta de células individuales a alteraciones químicas en el estado de salud y enfermedad y la localización de moléculas marcadas isotópicamente y fármacos terapéuticos en modelos de cultivo celular.1.1 Esta guía proporciona al analista de espectrometría de masas de iones secundarios (SIMS) un método criogénico para analizar células de cultivos de tejidos individuales que crecen in vitro. Esta guía es adecuada para tipos de muestras congeladas hidratadas y congeladas-liofilizadas. Se incluyen procedimientos para correlacionar microscopías ópticas, confocales de escaneo láser y electrónicas secundarias para complementar el análisis SIMS.1.2 Esta guía no es adecuada para cultivos celulares que no se adhieren al sustrato.1.3 Esta guía no es adecuada para muestras de cultivos celulares incrustadas en plástico. Esta norma no pretende abordar todos los problemas de seguridad, si los hay, asociados con su uso. Es responsabilidad del usuario de esta norma establecer prácticas apropiadas de seguridad y salud y determinar la aplicabilidad de las limitaciones reglamentarias antes de su uso.
ASTM E1881-06 Documento de referencia
ASTM E673 Terminología estándar relacionada con el análisis de superficies
ASTM E1881-06 Historia
2020ASTM E1881-12(2020) Guía estándar para análisis de cultivos celulares con SIMS
2012ASTM E1881-12 Guía estándar para análisis de cultivos celulares con SIMS
2006ASTM E1881-06 Guía estándar para análisis de cultivos celulares con SIMS
1997ASTM E1881-97(2002) Guía estándar para análisis de cultivos celulares con SIMS
1997ASTM E1881-97 Guía estándar para análisis de cultivos celulares con SIMS