T/AHFIA 043-2019 (Versión en inglés)

Estándar No.: T/AHFIA 043-2019
Idiomas: Chino, Disponible en inglés
Fecha de publicación: 2019
Organización: Group Standards of the People's Republic of China
Ultima versión: T/AHFIA 043-2019

Alcance: Términos principales: Los capítulos de esta norma constan del alcance, reactivos y materiales, instrumentos principales, pasos de determinación, cálculo de resultados, precisión, límite de detección e incertidumbre del método. Los principales parámetros técnicos y parámetros de verificación experimental en esta norma son los siguientes: 1. Confirmación de los principales parámetros técnicos 1.1 Selección de columnas cromatográficas T3 y columnas cromatográficas BEH C18 Utilizando el método de variable de factor único, finalmente se determinó que la La columna cromatográfica BEH C18 tiene una mejor separación y puede separar completamente el ácido α-linolénico y el ácido L-fenilláctico. El cromatograma se muestra en la Figura 1. La Figura 1 muestra: Cromatograma de la muestra estándar 1.2 Selección de la fase móvil La elección de la fase móvil para el experimento seleccionó primero agua-metanol, ácido acético-metanol, agua-acetonitrilo. Experimentos se realizaron con metanol-ácido fosfórico, etc. Después de pasar los experimentos, se descubrió que el efecto era deficiente y no se podía lograr bien la separación. Se descubrió que el uso de ácido fosfórico de baja concentración desempeñará un papel importante en la separación de las dos sustancias. Se prepararon soluciones de ácido fosfórico al 1%, 0,5% y 0,1% como fases móviles para realizar experimentos respectivamente. Los resultados experimentales mostraron que usar ácido fosfórico al 0,1% fue más efectivo en la separación. Bueno, y la forma del pico es buena, lo que cumple con los requisitos de uso. Por lo tanto, se seleccionó ácido fosfórico al 0,1% como fase móvil en el experimento para separar el ácido α-linolénico y el L- ácido fenilláctico. 1.3 Selección de longitud de onda Al buscar literatura y realizar experimentos, el experimento se resumió y resumió sistemáticamente durante la etapa experimental. Al escanear en el rango de longitud de onda de 210-500 nm, se obtuvo el escaneo 3D correspondiente. En los cromatogramas de extracción posteriores y en los informes bibliográficos, se determinó que la longitud de onda de detección óptima era 205 nm. La verificación de muestra estándar realiza la verificación de longitud de onda correspondiente. 2. Una vez determinados los parámetros técnicos de la verificación experimental, el equipo de establecimiento de estándares verificó el efecto mediante pruebas de precisión, reproducibilidad, estabilidad y recuperación. Las desviaciones estándar relativas RSD% de los resultados de mediciones paralelas obtenidas fueron todas inferiores a 5, y su la precisión cumplió con los requisitos metodológicos y realizó pruebas de verificación externas y cálculos de incertidumbre del método para mejorar la estandarización, la uniformidad y la naturaleza científica de este método. 2.1 Establecimiento de la curva estándar Absorba con precisión la solución estándar mixta de ácido α-linolénico y ácido L-fenilláctico y prepare 5 concentraciones de soluciones (concentración de la curva estándar de ácido α-linolénico: 20 mg/L, 40 mg/L, 80 mg/L, 160 mg/L, 400 mg/L; concentración de la curva estándar de ácido L-fenilláctico: 25 mg/L, 50 mg/L, 100 mg/L, 200 mg/L, 500 mg/L). Determine la solución de trabajo mixta estándar de 5 concentraciones, use la concentración como abscisa y el área del pico como ordenada para dibujar una curva estándar; R2 = 0,998, buena linealidad. 2.2 Precisión Para la misma muestra de licor, prepare 6 copias en paralelo de acuerdo con el método de preparación de muestras y utilice este método para detectar ácido α-linolénico y ácido L-fenilláctico (una muestra se inyectó repetidamente 6 veces). Los resultados de las pruebas de reproducibilidad se muestran en la Tabla 1 y la Tabla 2 Tabla 1 Repetibilidad del ácido α-linolénico y del ácido L-fenilláctico Resultados de la prueba 50,96 50,52 51,39 1,10 % Se puede ver en la Tabla 1 que la RSD de los seis Los resultados de mediciones repetidas son 2,20% y 1,08%, y el método tiene buena repetibilidad. Tabla 2 Resultados de las pruebas de reproducibilidad del ácido α-linolénico y del ácido L-fenil láctico Número de veces 1 2 3 4 5 6 RSD ácido L-fenil láctico 415,32 398,10 401,26 450,22 438,30 38 7.62 4,92% ácido α-linolénico 399,62 396,24 402,64 401,28 404,64 403,16 7,46% Como se muestra en la Tabla 2 anterior, la RSD de los resultados de la medición de reproducibilidad es 4,92% y 7,4 6%, respectivamente. Buen sexo. 2.3 Experimento de recuperación de adición: Tome tres muestras con contenidos conocidos de ácido α-linolénico y ácido L-fenil láctico: 48,62 mg/L y 15,45 mg/L respectivamente, y utilice ácido α-linolénico y ácido L-fenil láctico con concentraciones conocidas. Se prepararon tres niveles de concentración con el estándar de ácido láctico y se procesaron y probaron de acuerdo con el método descrito en el estándar. Las tasas de recuperación calculadas estuvieron entre 80% y 120%, como se muestra en la Tabla 3 a continuación. Tabla 3 Resultados experimentales de las tasas de recuperación enriquecidas de ácido α-linolénico y ácido L-fenilláctico en muestras de vino Concentración de sustrato de sustancia enriquecida (mg/L) Nivel enriquecido (mg/L) 40 100 400 Valor real Tasa de recuperación Valor real Tasa de recuperación Real Valor Tasa de recuperación Ácido L-fenilláctico 15,45 47,95 81,25% 112,85 97,40% 346,07 82,66% Ácido α-linolénico 48,62 85,12 91,25% 145,92 97,30% 415,14 91,63% 2,4 Prueba del método Límite y límite de cuantificación Realizar la siguiente sensibilidad Prueba de este método: La prueba de sensibilidad incluye la sensibilidad del instrumento y la sensibilidad del método. La sensibilidad del instrumento se expresa por el límite de detección del instrumento. Tome una mezcla de ácido L-fenilláctico y ácido α-linolénico. con una relación señal-ruido ≥ 3. La concentración mínima de la solución estándar es el límite de detección del instrumento; la sensibilidad del método se expresa mediante el límite de cuantificación del método. La concentración mínima de la solución estándar mixta de ácido L-fenil láctico y ácido α-linolénico con una relación señal-ruido de ≥ 9 es el límite de cuantificación del método. Los datos relevantes obtenidos se muestran en la Tabla 4. Tabla 4 Nombre de los datos del límite de cuantificación y límite de detección de ácido α-linolénico y ácido L-fenil láctico en muestras de vino Límite de detección mg/L Límite de cuantificación mg/L Ácido L-fenil láctico 1,00 5,00 ácido α-linolénico 1,00 5,00 2,5 Experimento de verificación fuera del sitio Este método se ha verificado en un laboratorio externo con el laboratorio de calidad líquida en fase líquida de Anhui Guoke Testing Technology Co., Ltd. Los resultados se muestran a continuación en la Tabla 5. Tabla 5 Resultados de comparación de laboratorio externo del ácido α-linolénico y del ácido L-fenilláctico en muestras de vino

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