T/SAIA 001-2021
Reglas de identificación molecular del ADN de la semilla de Bupleuri (Versión en inglés)
- Estándar No.
- T/SAIA 001-2021
- Idiomas
- Chino, Disponible en inglés
- Fecha de publicación
- 2021
- Organización
- Group Standards of the People's Republic of China
- Estado
- 2022-01
- Remplazado por
- T/SAIA 001-2022
- Ultima versión
- T/SAIA 001-2022
- Alcance
- Basado en la tecnología de PCR de fluorescencia en tiempo real, se estableció un sistema de detección de PCR de fluorescencia múltiple en tiempo real. La secuencia del gen ITS en el código de barras de ADN se utilizó como gen objetivo para diseñar cebadores y sondas universales para Bupleurum y cebadores y sondas específicos para Bupleurum. angustifolia y Bupleurum niger. Needle, a través de la optimización y selección del sistema de reacción en cadena de la polimerasa de fluorescencia y las condiciones de reacción, se estableció un método de reacción en cadena de la polimerasa de fluorescencia múltiple en tiempo real, que puede identificar simultáneamente Bupleurum angustifolia y Bupleurum angustifolia en la misma reacción de PCR Sistema Fuente de componentes de las semillas de Bupleurum. Extracción de ADN: mezclar 0,3 g de cada material y triturarlo hasta convertirlo en polvo en un mortero esterilizado bajo nitrógeno líquido. Precaliente el tampón de extracción CTAB que contiene 2% de β-mercaptoetanol en un baño de agua a 65°C; coloque 0,15 g de la muestra molida en un tubo de centrífuga de 2,0 ml; agregue 700 μL de tampón de extracción CTAB precalentado a 65°C, incube a 65 °C durante 30 minutos, agitar 3-4 veces durante el período; agregar 700 μL de cloroformo/alcohol isoamílico (24:1), invertir suavemente para mezclar bien, centrifugar a 12000 r/min durante 10 minutos, aspirar el sobrenadante y transferir a otro tubo de centrífuga; transfiera el sobrenadante a un nuevo tubo de centrífuga, agregue 2/3 del volumen de alcohol isopropílico preenfriado a -20°C, mezcle bien y colóquelo a -20°C durante 30°C min o toda la noche, centrifugar a 12000 r/min durante 15 min para recoger el precipitado; añadir 700 μl de etanol absoluto al 70 % para enjuagar, centrifugar a 12000 r/min durante 2 min, desechar el sobrenadante, repetir este paso; trabajar a temperatura ambiente o ultralimpio Secar el ADN al aire naturalmente en Taichung durante 5 a 10 minutos; agregue 50 μL de agua bidestilada o tampón TE, agite y mezcle bien, centrifugue a 12000 r/min durante 2 minutos y almacene a 4°C para su uso posterior o a -20° C.
T/SAIA 001-2021 Historia
- 2022 T/SAIA 001-2022 Especificación técnica para el exterminio de la mancha epidémica de Brucelosis en explotaciones ganaderas de ganado vacuno y ovino.
- 2021 T/SAIA 001-2021 Reglas de identificación molecular del ADN de la semilla de Bupleuri
