T/CSBM 0029-2022 (Versión en inglés)

Estándar No.: T/CSBM 0029-2022
Idiomas: Chino, Disponible en inglés
Fecha de publicación: 2022
Organización: Group Standards of the People's Republic of China
Ultima versión: T/CSBM 0029-2022

Alcance: Requisitos básicos Los usuarios de este documento deben seguir los requisitos de GB/T16886.1 y realizar pruebas de citotoxicidad y biocompatibilidad de materiales y/o dispositivos antes de realizar la evaluación in vivo descrita en este documento. Nota 1: Para un producto específico, cuando algunos de los métodos sugeridos en este documento pueden no ser completamente aplicables, se puede realizar un análisis de caso en función del estado actual del desarrollo tecnológico y en conjunto con las directrices nacionales y extranjeras pertinentes. Nota 2: Es posible que los resultados de los modelos animales no predigan completamente los resultados del uso en humanos, por lo que su aplicabilidad a los humanos debe interpretarse con precaución. 2 Modelo animal 2.1 Descripción general 2.1.1 Este capítulo proporciona consideraciones para determinar el modelo animal apropiado, el tamaño y la ubicación del defecto del cartílago articular, etc. Consulte la Tabla 1 para obtener más detalles. 2.1.2 La investigación con animales involucrada en este documento debe cumplir con requisitos éticos y de bienestar. Tabla 1 Tamaño (diámetro), mm Conejo Conejo Blanco de Nueva Zelanda 1 a 2 años 15 a 30 - 6 Cabras Cabras, cabras españolas, cabras lecheras, cabras Boer 2 a 3 años 40 a 70 Cóndilo femoral, surco troclear, meseta tibial, rótula 1,5 ~ 2,0 6 Ovejas, ovejas Suffolk, ovejas Texel 2 ~ 3 años 35 ~ 80 Cóndilo femoral, surco troclear 1,7 7 Nota: "-" se refiere a Aún no hay datos relevantes. 2.2 Tamaño de la articulación y selección de carga 2.2.1 El daño del cartílago articular hialino humano a menudo ocurre en la articulación de la rodilla, principalmente en la parte medial (como el cóndilo femoral medial y la meseta tibial). Por lo tanto, se debe elegir la articulación de la rodilla para evaluar la reparación/regeneración del cartílago en modelos animales. 2.2.2 Los animales de diferentes especies tienen diferencias significativas en peso, anatomía articular y forma de andar, y tienen diferentes mecánicas articulares. Estos factores afectan el grosor y la distribución del cartílago articular, el contenido de macromoléculas y la distribución de la matriz articular y la estructura del colágeno. Los vínculos anteriores desempeñan un papel importante en la respuesta a la enfermedad o lesión del cartílago articular. Se deben considerar cuidadosamente los modelos animales adecuados para la fase de implantación. 2.2.3 Se deben seleccionar los animales y las partes de las articulaciones apropiados, especialmente la superficie articular y el grosor del cartílago articular, para estudiar y optimizar completamente la fórmula, el diseño, el tamaño y el equipo de soporte que se espera utilizar en el cuerpo humano. ellos: 　——Los animales grandes tienen una mayor superficie y grosor del cartílago articular, que están más cerca de las condiciones humanas y son más adecuados para la investigación de la reparación del cartílago articular; 　——Los defectos grandes generalmente requieren algún tipo de fijación para proteger los implantes y reducir el implante. dislocación. Los métodos de fijación de implantes pueden afectar negativamente al tejido huésped que rodea el defecto y la reparación. Los animales pequeños generalmente no requieren inmovilización, y al predecir los resultados de ensayos con animales grandes y humanos que requieren inmovilización a partir de los resultados de ensayos con animales pequeños, es necesario prestar atención a las diferencias en el diseño de implantes en los ensayos. 2.2.4 Para cada animal, el defecto de tamaño crítico se define como el tamaño más pequeño (diámetro) del defecto que el animal no puede reparar sin intervención. El tamaño del defecto crítico suele diferir en cada animal y debe considerarse cuidadosamente al diseñar el tamaño del implante y los métodos de fijación. 2.2.5 La carga mecánica afecta la reparación del cartílago articular. Entre los factores mecanobiológicos, la presión hidrostática intermitente y el esfuerzo cortante juegan un papel importante en la regulación del desarrollo, la nutrición y la degeneración de las articulaciones del cartílago. El impacto de la magnitud de la carga mecánica o el tiempo de acción sobre el implante, el cartílago articular original alrededor del sitio del implante y el tejido óseo subyacente varía con la ubicación anatómica y la ubicación de la articulación. Por lo tanto, esto debe reflejarse al seleccionar el sitio del defecto para evaluar el Implante Efecto de la carga mecánica sobre los implantes: 　——Al analizar las condiciones de fuerza del sitio implantado durante la bipedestación y el movimiento, se debe considerar el modo de andar y la postura de cada especie de animal; 　——Cóndilos y poleas femorales. El estado de tensión y La intensidad del surco y la meseta tibial, así como las diferentes partes anatómicas de la misma superficie articular, son significativamente diferentes: el implante está sujeto a una tensión excesiva y que cambia rápidamente debido a los animales que corren, saltan, una extensión o flexión excesiva de la articulación, conducirá a una mayor variabilidad en los resultados de las pruebas, y se deben tomar medidas para reducir los factores de comportamiento o de otro tipo que conducen a movimientos articulares rápidos y/o excesivos. 2.3 Género y edad de los animales 2.3.1 Debido a los efectos de los esteroides en la circulación sanguínea sobre el metabolismo y la regeneración del cartílago y el hueso, se debe considerar el sexo de los animales de experimentación. No se deben utilizar animales gestantes y lactantes. Los animales de prueba deben ser del mismo sexo. 2.3.2 Durante el proceso de crecimiento, los huesos y las articulaciones experimentan cambios dinámicos en el metabolismo y la remodelación. Debido al impacto de estos procesos fisiológicos en la reparación de los tejidos, la edad de cada animal en la prueba debe exceder la edad de madurez esquelética. Los animales de prueba deben tener las epífisis cerradas. La madurez esquelética de cada animal es diferente y se puede considerar la radiografía para determinar si es necesario. 2.3.3 Los animales de mayor edad tienen más probabilidades de desarrollar osteopenia y enfermedades degenerativas de las articulaciones, como la osteoartritis, y una capacidad reducida de reparación del cartílago de las articulaciones. Por lo tanto, se debe evitar el uso de animales mayores a menos que estas condiciones sean importantes para el propósito previsto de la implantación. 2.3.4 El conjunto de células madre mesenquimales, la capacidad de respuesta del factor de crecimiento y la actividad metabólica celular generalmente disminuyen con la edad. Por lo tanto, los procesos de reparación que dependen del número y la actividad de las células huésped pueden tener algún impacto en los animales más viejos. 2.4 Período de investigación 2.4.1 El período de investigación depende de la etapa de desarrollo del implante, la especie animal, el tamaño del defecto y la composición y diseño del implante. 2.4.2 Los modelos de animales pequeños que implantan pequeños defectos entre 6 y 12 semanas pueden proporcionar información sobre el tiempo de retención de los implantes y dispositivos de fijación, así como el tipo de reparación. 2.4.3 Los estudios en modelos animales grandes de 8 a 12 semanas deben limitarse a proporcionar información sobre biocompatibilidad, respuesta celular temprana y supervivencia y condición del implante dentro del defecto. 2.4.4 Juzgar el grado de reparación o regeneración del cartílago articular basándose en los resultados de las pruebas morfológicas y bioquímicas del tejido generalmente requiere de 6 a 12 meses de investigación. Nota: Los resultados de las pruebas morfológicas e histobioquímicas incluyen el cartílago adyacente y la interfaz ósea debajo del defecto del cartílago, así como el sitio del cartílago opuesto. 2.5 Características de los modelos animales 2.5.1 Sin modelos 2.5.1.1 En comparación con los animales grandes, los modelos de conejos suelen ser más económicos. 2.5.1.2 Debido a la pequeña superficie y al fino espesor del cartílago articular de conejo, el tamaño del defecto es limitado y la evaluación de los métodos de fijación de los implantes dentro del defecto es difícil de implementar. 2.5.1.3 El modelo de conejo es adecuado para evaluar la biocompatibilidad, la formulación del material y la evaluación del diseño básico de implantes. El cóndilo femoral del conejo y el surco troclear son los sitios más utilizados para la evaluación de implantes, y también se ha estudiado el uso de la rótula. 2.5.1.4 Generalmente, la tasa de reparación, el tipo y el grado del cartílago articular de conejo son más significativos que los de animales más grandes, lo que puede estar relacionado con su mayor actividad metabólica y la densidad de células madre pluripotentes junto al sitio del defecto. . 2.5.2 Modelo canino La superficie de la articulación de la rodilla canina es de tamaño mediano, entre la de los conejos y la de las ovejas adultas. El surco troclear canino y el cóndilo femoral se pueden utilizar como sitios para la evaluación del implante. 2.5.3 Modelo de cerdo La anatomía del ángulo de la articulación tibial del cerdo se diferencia de la de muchos otros cuadrúpedos en que su rango de movimiento es reducido. El cóndilo femoral porcino se puede utilizar como sitio de evaluación del implante. 2.5.4 Modelo ovino 2.5.4.1 El cóndilo femoral de la oveja se utiliza a menudo como lugar de prueba de implantación. 2.5.4.2 Dentro del rango normal de movimiento, el contacto entre el cóndilo femoral y la meseta tibial se produce caudalmente a la meseta tibial. El rango de movimiento de la articulación tibiofemoral varía de 72°±3° (flexión completa) a 145°±5° (extensión completa). 2.5.4.3 En algunos estudios se ha observado calcificación del tejido posquirúrgico utilizando modelos de ovejas. 2.5.5 Modelo de cabra 2.5.5.1 Debido al tamaño de las articulaciones de las rodillas de las patas traseras de las cabras, el grosor del cartílago articular y la facilidad de adquisición y manipulación, las cabras representan una buena clase de modelos animales para la investigación sobre articulaciones. reparación de cartílago. . El cóndilo femoral y el surco troclear de cabra se utilizan con mayor frecuencia como sitios de prueba de implantación, aunque también se ha informado el uso de superficies como la meseta tibial y la rótula. 2.5.5.2 Dentro del rango normal de movimiento, el contacto entre el cóndilo femoral y la meseta tibial ocurre en el lado caudal de la meseta tibial, y el rango de movimiento de la articulación tibial es similar al de las ovejas. Generalmente se considera que las cabras toleran mejor la intervención quirúrgica humana que las ovejas. Cada cabra debe pasar un análisis de sangre para detectar encefalitis caprina antes de su inclusión en el grupo de prueba. 3 Sitio del defecto 3.1 El defecto utilizado para el implante del cóndilo femoral puede variar de 2 mm a 15 mm de diámetro y de 1 mm a 10 mm de profundidad dependiendo del tamaño del animal. Generalmente, el defecto no debe exceder del 15% al 20% del área articular o del 50% al 60% del ancho del cóndilo. Debido a la morfología convexa del cóndilo femoral, la profundidad del defecto puede variar del centro al borde. La conexión articular, incluida la función del menisco y la meseta tibial, debe considerarse en función de la ubicación del defecto femoral supracondilar, especialmente en posición de reposo. 3.2 El surco troclear se puede utilizar como sitio de evaluación para soportar cargas y fuerzas de corte diferentes a las del cóndilo femoral. Para acceder a este sitio, es posible que se requiera una dislocación rotuliana antes de crear el defecto. El grosor del cartílago articular del surco troclear suele ser más delgado que el del cóndilo femoral en el mismo animal, y este factor debe tenerse en cuenta en el diseño del prototipo del implante. Debido a la depresión del surco troclear, la profundidad del defecto puede variar según el tamaño del defecto y su ubicación dentro del surco troclear (pared o piso). Se debe prestar atención a las diferencias en la carga mecánica en los lados craneal y caudal (proximal y distal) de la superficie articular del surco troclear y al impacto de estas diferencias en la reparación. 3.3 Plataforma tibial La plataforma tibial se utiliza en algunos experimentos. Se utiliza con menos frecuencia debido al difícil acceso quirúrgico que provocan el cóndilo femoral, el menisco y el ligamento cruzado. 4 Tipos de defectos, fijación de implantes e inmovilización de articulaciones 4.1 Defectos del cartílago y defectos osteocondrales 4.1.1 Utilizando instrumentos adecuados, el cartílago y el tejido óseo se pueden eliminar sin dañar excesivamente el tejido circundante, formando cartílago de espesor total o parcial o defectos osteocondrales transóseos y de espesor total. 4.1.2 Para defectos del cartílago, se puede utilizar un trépano o una fresa, pero se debe tener cuidado para evitar extraer o dañar el tejido óseo subcondral. La velocidad y la presión del taladro deben seleccionarse cuidadosamente porque se puede generar un calor excesivo que cause necrosis térmica del tejido circundante. Alternativamente, se puede utilizar legrado para eliminar el cartílago hasta el hueso subcondral, primero usando una punción de biopsia para crear un contorno consistente del defecto y luego usando una pequeña cureta de hueso para eliminar el cartílago. 4.1.3 Cabe señalar que existen cambios tanto en el grosor del cartílago como en el grosor de la placa del hueso subcondral. Los experimentadores deben considerar esta variación al determinar la profundidad para obtener un defecto condral u osteocondral consistente. El defecto debe crearse perpendicular a la superficie articular. 4.1.4 Se pueden crear múltiples defectos en una superficie articular para evaluar más de un implante. Sin embargo, se debe considerar el tamaño y la ubicación de múltiples defectos, así como el impacto en el tejido circundante. La prueba debe incluir controles negativos y otros controles. 4.1.5 El daño excesivo del cartílago articular puede aumentar el riesgo de sinovitis crónica. La distribución inestable de cargas mecánicas causada por defectos demasiado grandes o demasiados en el mismo cartílago articular puede dañar el tejido del cartílago circundante, afectando así la evaluación del rendimiento del implante. 4.2 La microfractura puede utilizar la microfractura de la placa ósea subcondral en la parte inferior del defecto para lograr sangrado. Se debe utilizar la instrumentación adecuada para crear sitios de penetración ósea consistentes y minimizar el daño excesivo a la placa ósea subcondral. La respuesta del tejido óseo subcondral a la microfractura implica diversos grados de resorción (osteólisis). Los factores que afectan la osteólisis incluyen el grado de daño óseo, la carga mecánica, el líquido sinovial y los productos de degradación de los materiales del implante. 4.3 Fijación del implante: Dependiendo del tamaño, ubicación, especie animal, etc. del defecto, seleccione un método de fijación del implante adecuado para evitar movimientos excesivos y/o dislocaciones. Los métodos de fijación deben reflejar las fuerzas experimentadas al estar de pie y en movimiento. Se deben considerar los efectos a corto y largo plazo de la fijación sobre el tejido circundante y el rendimiento del implante. 4.4 La carga y el frenado de las articulaciones deben considerar la anatomía de las articulaciones, el tamaño de las articulaciones, el modo de andar del animal, etc., para determinar el método de frenado apropiado. Se pueden utilizar férulas, dispositivos de fijación externa y yesos en el posoperatorio para reducir el movimiento y la carga de las articulaciones. Al determinar la duración de la inmovilización se deben considerar el impacto de la atrofia por desuso y las posibles consecuencias negativas sobre el cartílago articular. Después de daños al cartílago articular en humanos y animales, la actividad activa continua tiene ciertos beneficios para el proceso de regeneración. Tratamientos similares tienen baja viabilidad en ensayos con modelos animales y no son ampliamente aceptados. Se deben considerar los problemas de cuidados posoperatorios asociados con yesos y férulas. Los animales deben ser examinados diariamente por un veterinario calificado para detectar cualquier deformidad grave y signos de malestar excesivo causados por la inmovilización de las articulaciones. 5 Proceso de prueba 5.1 Preparación de implantes Se debe evaluar la biocompatibilidad de todos los materiales para las pruebas de implantación en animales de acuerdo con los requisitos de GB/T16886.1. Los componentes del implante pueden esterilizarse o prepararse asépticamente, o pueden esterilizarse terminalmente utilizando métodos que se sabe que son apropiados para los componentes y la función del implante. 5.2 El defecto debe construirse para detectar cambios patológicos inaceptables en la articulación y el líquido sinovial. El tamaño del defecto debe ser consistente. El defecto debe irrigarse durante y después de la perforación para reducir el calor y eliminar las partículas de hueso y cartílago retenidas antes de la implantación. Para reducir el daño tisular causado por la necrosis térmica, se debe utilizar un taladro eléctrico con una velocidad no superior a 500 r/min. La broca debe diseñarse para reducir el posible movimiento durante la perforación. Se puede utilizar una cánula que penetre en la capa de cartílago articular para centrar el orificio de perforación y reducir el movimiento excéntrico durante la perforación. La extracción de cartílago hasta que se cree un defecto de cartílago en la placa subcondral no debería causar sangrado. Cuando se produce un defecto osteocondral a través de la penetración de la placa subcondral, generalmente se produce un sangrado puntiforme en la superficie ósea que cambia con la profundidad. Se recomienda utilizar una esponja hemostática para controlar el sangrado intenso antes de la colocación del implante. La extensión del sangrado variará significativamente entre especies animales y grupos de prueba. Durante la operación quirúrgica, se debe utilizar solución salina estéril para mantener húmeda la superficie de la articulación y evitar la deshidratación. 5.3 Inserción y fijación del implante El implante debe implantarse de forma estándar y repetible. Se debe tener cuidado para garantizar que el tejido articular que rodea el defecto no sufra daños indebidos. El implante debe hacer contacto con las paredes verticales del defecto en la periferia y en la base para defectos de espesor total. Si se utiliza un colgajo de tejido (p. ej., periostio), debe anclarse al cartílago existente de manera que minimice el daño al cartílago articular adyacente y opuesto. El implante debe colocarse a una profundidad tal que su superficie articular coincida suficientemente (a ras) con la superficie articular circundante. La sutura de la cavidad sinovial debe realizarse para minimizar la fricción de la sutura en la superficie articular. 5.4 Recuperación y gestión Las condiciones de recuperación de diseño deben reducir el potencial de estrés y ejercicio excesivo. Para cabras y ovejas, se recomienda un corral reconstituyente que reduzca la actividad excesiva durante 2 a 3 días. Los animales deben ser monitoreados con frecuencia y las observaciones registradas para garantizar un estado fisiológico y de salud adecuado. Cuando un animal de experimentación se libera en una población mayor, un veterinario debe verificar el estado de salud del animal. 5.5 Supervivencia La ferulización reduce el movimiento y la carga de las articulaciones en comparación con los apósitos estándar; sin embargo, se debe considerar el impacto de la atrofia por desuso y sus posibles consecuencias adversas sobre el cartílago articular al elegir la duración del tratamiento. Se recomiendan imágenes en estudios para evaluar la colocación de implantes. Después de la recuperación, los animales grandes deben permanecer en recintos protectores durante al menos 9 días. Luego, los animales pueden ser liberados en corrales o colonias. Los veterinarios deben examinar periódicamente a los animales en busca de deformidades graves y signos de malestar. 5.6 Necropsia de animales 5.6.1 Los animales deben ser sacrificados de manera humana de acuerdo con las especificaciones factibles de los métodos y regulaciones de manejo correspondientes. 5.6.2 Se debe realizar una necropsia del animal para determinar si existen deformidades graves en las articulaciones que puedan afectar los resultados del estudio. La evaluación macroscópica debe incluir: a) Color y cantidad de líquido membranoso, y descripción de la apariencia de la cavidad articular; b) Aspecto del cartílago articular original (presencia o ausencia de fibrilación); c) Alrededor La apariencia del hueso ( presencia o ausencia de osteofitos); d) Descripción del color y cantidad de tejido en el sitio de reparación (incluyendo apariencia y estructura de la superficie), y el grado de integración del implante. Nota: Se recomienda obtener muestras de biopsia de acuerdo con los requisitos de ASTM F561. 5.6.3 El implante debe extraerse a lo largo del cartílago y el tejido óseo circundante, y también se puede recolectar el cartílago alrededor de la superficie articular y el tejido óseo subyacente directamente opuesto al sitio del implante (cantidad estandarizada). 5.6.4 El tejido de la muestra debe colocarse en una solución que cumpla con los requisitos de morfología (parafina descalcificada o inclusión de plástico no descalcificado), bioquímica tisular o pruebas biomecánicas y otros métodos de prueba. Se debe obtener tejido sinovial de varios sitios estándar para evaluar la absorción de partículas y la agregación celular inducida por partículas. 6 Resultados y análisis 6.1 Examen de imágenes 6.1.1 Selección del método Los siguientes métodos de evaluación se pueden seleccionar según sea necesario. 6.1.2 Evaluación de resonancia magnética 6.1.2.1 Se recomienda recopilar datos preoperatorios y posoperatorios para facilitar el análisis comparativo posterior. Al mismo tiempo, se puede considerar la evaluación de la puntuación M0CART o el análisis del mapa de tiempo de relajación transversal (mapeo T2). 6.1.2.2 El examen de resonancia magnética se puede utilizar para mostrar lesiones de tejido blando de las articulaciones y observar los niveles de líquido sinovial, cartílago articular y tejido blando alrededor de las articulaciones en la cavidad articular. El mapeo T2 refleja principalmente cambios en el contenido, la conformación y el contenido de agua del colágeno en el cartílago; la resonancia magnética mejorada retardada del cartílago (dGEMRIC) refleja indirectamente el contenido de GAG en el tejido del cartílago según las imágenes de densidad de carga negativa en el cartílago. 6.1.2.3 Con respecto a la resonancia magnética del cartílago animal, a menudo se eligen los siguientes animales de experimentación: 　——El espesor del cartílago del conejo de Nueva Zelanda es inferior a 1 mm. Aunque se pueden obtener imágenes a 3,0 T, el tiempo de obtención de imágenes es largo y la bobina Los requisitos son altos y se recomienda utilizar imágenes de bobina experimentales con animales especiales; 　——El grosor del cartílago de la articulación de la rodilla de ovejas, cerdos y perros es aceptable, y se pueden usar bobinas de la articulación de la muñeca o de la rodilla para obtener imágenes. a resonancia magnética de 3,0 T. 6.1.2.4 Las condiciones de exploración por resonancia magnética de diferentes animales serán diferentes y los parámetros de evaluación del equipo de resonancia magnética con diferentes intensidades de campo también serán diferentes. El método de evaluación por resonancia magnética in vivo se puede realizar con referencia al método YY/T 1636. Tomando como ejemplo el tamaño de la articulación de la rodilla del conejo de Nueva Zelanda y sus características específicas, las condiciones para la evaluación por resonancia magnética del cartílago y el hueso subcondral utilizando equipos específicos, intensidades de campo y condiciones específicas del conejo de Nueva Zelanda: a) Cuando se usa 3.0 En el sistema de imágenes por resonancia magnética T, se utilizan imágenes ponderadas en T1, imágenes ponderadas en T2 e imágenes ponderadas en densidad de protones para evaluar la reparación del tejido, la reflexión del tejido periférico, el derrame articular y otras afecciones del tejido en la articulación del cartílago o área dañada osteocondral. Los parámetros de referencia de exploración son los siguientes: Tabla 2; Tabla 2 3.0 Parámetros de referencia de exploración de imágenes por resonancia magnética secuencia de imágenes dirección de imagen tiempo de repetición, ms tiempo de eco, ms campo de visión, m flip angle, layer thickness, mm distance Factor, % Matrix Bandwidth, Hz/pixel Fat-saturated T2-weighted TSE imaging Sagittal plane Sagittal plane 2000 36 70 150 2 10 256 ×256 199 Imágenes GRE 3D ponderadas en T1 Plano sagital 26 4,6 60 25 1 20 512 × 256 200 Nota: Los parámetros de diferentes equipos se pueden ajustar según la situación. b) Utilice resonancia magnética de alta resolución de 9,4 T para detectar de acuerdo con la secuencia de escaneo de imágenes 3D-FLASH. Los parámetros de referencia de escaneo se muestran en la Tabla 3. Tabla 3 Secuencia de imágenes de referencia de exploración por resonancia magnética de alta resolución de 9,4 T Dirección de la imagen Tiempo de repetición, ms Tiempo de eco, ms Ángulo de giro, ° Campo de visión, mm Ancho de banda de la matriz, kHz 3D- Imágenes FLASH 48 6,22 10 35 × 25,6 × 25,6 350 × 256 × 128 30 Nota: Los parámetros de diferentes equipos se pueden ajustar según la situación. 6.1.3 Evaluación por rayos X Los rayos X se pueden utilizar para demostrar la estructura ósea de la articulación. Generalmente, podemos juzgar si hay un defecto en el cartílago articular observando si el espacio articular es estrecho y el grado de estenosis, la formación de osteofitos, si la superficie ósea es lisa y los cambios generales del hueso subcondral en la reparación. zona, etc., y podemos predecir y diagnosticar enfermedades articulares tempranas. 6.1.4 Evaluación por ultrasonido de alta frecuencia La ecografía de alta frecuencia se puede utilizar para detectar un aumento del derrame articular, engrosamiento sinovial y daño del cartílago y determinar su extensión. 6.1.5 La artrografía por TC detecta cuantitativamente los cambios y la distribución del contenido de GAG en el cartílago articular para determinar el grado de daño del cartílago articular. Este método tiene alta sensibilidad y especificidad para comprobar la integridad del cartílago. 6.1.6 Evaluación por microTC 6.1.6.1 Puede proporcionar una evaluación cuantitativa más precisa del espacio articular y los osteofitos. En particular, se evaluaron cuantitativamente los cambios reactivos del hueso subcondral en el modelo de reparación de defectos del cartílago, y se evaluaron cuantitativamente las condiciones de reparación del cartílago y del hueso subcondral y el impacto sobre el hueso subcondral circundante en el modelo de defecto osteocondral. 6.1.6.2 Cuando el daño del cartílago llega al hueso subcondral, se requiere una evaluación de la remodelación ósea. La evaluación de la remodelación ósea debe incluir al menos los parámetros enumerados en la Tabla 4. Tabla 4 Parámetros de evaluación de la reconstrucción ósea Fracción relativa de volumen óseo por unidad; (BV/TV) ; ; 1/mm Espesor trabecular (Tb.Th) ; μm espesor de la placa de cartílago ; ; 2 .1 Observar si hay derrame en la articulación de la rodilla, cambios en el color del derrame, transparencia y viscosidad, etc.; si hay cambios en el color y textura de la membrana sinovial, ya sea que haya edema, congestión, hiperplasia, etc.; superficies articulares condilares medial y lateral. Cambios como color, presencia de rugosidades, proliferación, producción de osteofitos, etc. 6.2.2 El implante debe extraerse a lo largo del cartílago y tejido óseo circundante para determinar si existen anomalías graves dentro de la articulación que puedan afectar los resultados del estudio. El contenido de la evaluación bruta debe hacer referencia a los requisitos de necropsia de animales en 5.6 de este documento, y la puntuación puede basarse en el sistema de puntuación bruta del cartílago (consulte la Tabla A.1). 6.2.3 También se puede recolectar el cartílago alrededor de la superficie articular y el tejido óseo subyacente directamente opuesto al sitio del implante. 6.3 Evaluación histológica e inmunohistoquímica 6.3.1 Requisitos generales 6.3.1.1 La evaluación histológica e inmunohistoquímica se utiliza para evaluar el alcance y la calidad de la regeneración o reparación del tejido dentro del defecto. 6.3.1.2 Las secciones de tejido deben cortarse y teñirse en serie para evaluar la calidad del tejido y detectar GAG. 6.3.1.3 La tinción estándar incluye, entre otras: hematoxilina y eosina, safranina-0, azul de toluidina, azul de anilina y/o tinción tricrómica modificada, tinción de Weigert. 6.3.1.4 Análisis inmunohistoquímico, como tinción de colágeno tipo II, tinción de colágeno tipo I, tinción de colágeno tipo X y proteoglicanos. 6.3.2 Análisis microscópico y puntuación 6.3.2.1 Para muestras que contienen tejido óseo y cartilaginoso, el fosfato de calcio y el carbonato de calcio del tejido deben eliminarse mediante métodos químicos o físicos mediante un tratamiento de descalcificación y luego seccionarse. 6.3.2.2 Existen muchos métodos de descalcificación. Para garantizar un corte suave, mantener un contraste de tinción nítido y preservar el antígeno tanto como sea posible, la selección debe basarse en el tipo y los requisitos del tejido que se procesa y la tiempo permitido para la descalcificación, entre los cuales: 　————Descalcificación del ácido nítrico: muy rápida, pero los núcleos celulares no se tiñen fácilmente y tienen un mayor impacto sobre el antígeno; 　——EDTA, electrólisis y otros métodos tiñen de manera brillante y preservan el antígeno Bueno, pero el tiempo de descalcificación es mayor. 6.3.2.3 Existen dos métodos principales para realizar secciones de tejido: secciones de parafina y secciones congeladas: 　——Las secciones de parafina pueden mantener la estructura morfológica de las células del tejido y son fáciles de almacenar a temperatura ambiente; 　——Las secciones congeladas no someterse a deshidratación Con una congelación rápida, el tejido mantiene su dureza original, las secciones son suaves, el procesamiento del tejido es uniforme y consistente, la estructura del tejido es clara y el contraste de la tinción nucleoplásmica es bueno, y la tinción de la sección congelada se realiza en tejido fresco , haciendo que la coloración del tejido sea más viva. Pero es necesario conservarlo en un frigorífico de baja temperatura a -80°C. 6.3.2.4 Para evaluar el grado de reparación del cartílago se puede utilizar el sistema de puntuación macroscópica del cartílago apropiado, tal como se enumera en la Tabla A.1. Para evaluar el desempeño de un dispositivo implantado en la reparación tanto del cartílago como del hueso subcondral, se puede realizar una evaluación histológica utilizando un sistema de puntuación histológica como Wakitani o 0'Driscoll para determinar lo siguiente: a) La relación entre el cartílago hialino dentro y alrededor del defecto sitio y calidad del fibrocartílago; b) Aspecto de la superficie y continuidad con el cartílago nativo; c) Grado de integración del cartílago reparado con hueso y cartílago nativo; d) Calidad de la reconstrucción del hueso subcondral; e) Morfología celular; f) Calidad del tejido que rodea el dispositivo de fijación . 6.3.2.5 El análisis histomorfométrico se puede utilizar para medir parámetros histológicos como el espesor, la integración, el número de células y la calidad de la superficie. 6.3.2.6 Debido a que la composición bioquímica y la organización del tejido de reparación pueden cambiar con el tiempo, los puntos de tiempo inferiores a 6 meses no necesariamente reflejan resultados a largo plazo. 6.3.2.7 La evaluación histológica a corto plazo puede utilizarse para la detección y la optimización, mientras que la evaluación a largo plazo debe basarse en pruebas histológicas, bioquímicas y posiblemente mecánicas. 6.4 Análisis bioquímico 6.4.1 El cartílago articu

T/CSBM 0029-2022 Historia

2022 T/CSBM 0029-2022 Guía estándar para la evaluación in vivo de dispositivos implantables destinados a reparar o regenerar el cartílago articular

T/CSBM 0029-2022Guía estándar para la evaluación in vivo de dispositivos implantables destinados a reparar o regenerar el cartílago articular (Versión en inglés)

T/CSBM 0029-2022 Historia

T/CSBM 0029-2022
Guía estándar para la evaluación in vivo de dispositivos implantables destinados a reparar o regenerar el cartílago articular (Versión en inglés)