T/AFFI 038-2023 Determinación de 8 residuos de micotoxinas en pasas mediante cromatografía líquida-espectrometría de masas en tándem (Versión en inglés)
1 Alcance Esta norma requiere pasas en Xinjiang. Esta norma especifica los métodos de prueba para la aflatoxina B1, la aflatoxina B2, la aflatoxina G1, la aflatoxina G2, la ocratoxina A, la toxina T-2, la fumonisina B2 y la patulina en las pasas. Este documento es aplicable a la detección de 8 tipos de residuos de micotoxinas en pasas en esta región. 2 Documentos normativos de referencia Los documentos citados en este documento son esenciales para la aplicación del presente documento. Para los documentos de referencia fechados, solo se aplica a este documento la versión fechada. Para los documentos de referencia sin fecha, se aplica a este documento la última versión (incluidas todas las modificaciones). GB/T 6682 Especificaciones de agua de laboratorio analítico y métodos de prueba 3 Términos y definiciones No hay términos ni definiciones en este artículo. 4 Principio 5 Reactivos y materiales A menos que se indique lo contrario, en el análisis solo se utilizan reactivos confirmados como de grado analítico y agua de primer grado especificada en GB/T 6682. 5.1 5.1.5 Citrato de sodio dihidrato (analíticamente puro); 5.1.6 Sal disódica de citrato sesquihidrato (analíticamente pura); 5.1.7 Solución de ácido fórmico y acetonitrilo al 1 %: medir 10 ml de ácido fórmico. Diluir acetonitrilo en un matraz volumétrico de 1000 ml y mezclar uniformemente; 5.1.8 Solución de agua y ácido fórmico al 0,1%: medir 1 ml de ácido fórmico y agregar agua pura a un matraz volumétrico de 1000 ml y mezclar uniformemente; 5.2 Estándares; Aflatoxina B1 (n.º CAS: 1162-65 -8), pureza superior al 98%, Aflatoxina B2 (N.° CAS: 7220-81-7), pureza superior al 98%, Aflatoxina G1 (N.° CAS: 1165-39-5), pureza superior al 98 %, aflatoxina G2 (número CAS: 7241-98-7), pureza superior al 98%, ocratoxina A (número CAS: 303-47-9), pureza superior al 98%, toxina T-2 (número CAS: 21259-20-1), la pureza es superior al 98%, fumonisina B2 (número CAS: 116355-84-1), la pureza es superior al 95%, patulina (número CAS: 149-29-1), la pureza es mayor al 98%. 5.3 Preparación de la solución estándar 5.3.1 Preparación de la solución madre estándar de patulina (1 mg/mL): Pesar con precisión 10 mg de estándar de patulina y diluir a 10 ml con acetonitrilo, -18°C Almacenar congelado y protegido de la luz, válido por 12 meses. 5.3.2 Preparación de solución intermedia estándar de patulina (10 μg/mL): Pipetear con precisión 1,0 ml de solución madre estándar de patulina y diluir a 100 ml con acetonitrilo, congelar y almacenar en la oscuridad a -18°C, válido por 6 años meses. . 5.3.3 Preparación de soluciones madre estándar mixtas de las otras 7 micotoxinas (1 mg/mL): Pesar con precisión 10 mg de cada uno de los 7 estándares de toxina, diluir a 10 ml con metanol y congelar a -18 °C Almacenar lejos de ligero, válido por 12 meses. 5.3.4 Preparación de soluciones intermedias estándar mixtas de otras 7 micotoxinas (10 μg/ml): Pipetear con precisión 1,0 ml de la solución madre estándar mixta y diluir a 100 ml con metanol, luego congelar y almacenar a -18 °C en la oscuridad. . , válido por 6 meses. 5.4 Materiales 5.4.1 Gel de sílice silanizado con etilendiamina-N-propilo (PSA): tamaño de partícula: 40 ~ 60 μm 5.4.2 Gel de sílice unido a octadecilsilano (C18): tamaño de partícula: 50 μm 5.4.3 Negro de humo grafitado (GCB): tamaño de partícula 40~120μm; 5.4.4 Protón cerámico homogéneo: 2 cm (longitud) × 1 cm (diámetro exterior), o equivalente; 5.4.5 Membrana de filtro microporoso: 13 mm × 0,22 μm, o equivalente. 6 Instrumentos y equipos 6.1 Cromatografía líquida-espectrómetro de masas de triple cuadrupolo: equipado con fuente de ionización por electropulverización (ESI); 6.2 Balanza electrónica: sensibilidad 0,01 gy 0,01 mg; 6.3 Centrífuga: velocidad no menor de 5000 rpm; 6,4 Limpiador ultrasónico; 6,5 Triturador de pañuelos. 6.6 Mezclador Vortex. 7 7.2 Extracción de la muestra Pese con precisión 2 g de muestra triturada (con una precisión de 0,01 g) en un tubo de centrífuga de 50 ml, agregue 10 ml de agua, déjelo reposar durante 30 minutos, agregue 10 ml de fórmico al 1 %. extracto ácido de acetonitrilo, 1 homogeneizador cerámico, agitar y mezclar durante 30 segundos, agregar 5 g ~ 7 g de cloruro de sodio, 1 g de citrato de sodio dihidrato, 0,5 g de citrato disódico sesquihidrato, agitar y mezclar durante 30 s, extracción ultrasónica durante 20 min, centrifugar a A 5000 rpm durante 5 minutos, absorba 2 ml de sobrenadante en una centrífuga de plástico que contenga 150 mg de sulfato de magnesio anhidro, 50 mg de PSA y 50 mg de C18. En el tubo, para muestras de colores más oscuros, agregue otros 25 mg de GCB en el tubo de centrífuga, agite y mezcle durante 30 segundos, déjelo reposar durante 1 minuto y tome la membrana de filtro de sobrenadante (5.4.5) para medir. 7.3 Medición 7.3.1 Columna de condiciones de referencia LC: cuando mida la patulina, use una columna cromatográfica T3 (2,1 mm × 100 mm, tamaño de partícula 1,8 μm) o una columna cromatográfica de rendimiento equivalente; cuando mida las otras 7 micotoxinas , utilice una columna cromatográfica C18 (2,1 mm × 100 mm, tamaño de partícula 1,9 μm) o una columna con un rendimiento equivalente. Fase móvil: Al medir patulina, A: agua, B: acetonitrilo; al medir otras 7 micotoxinas, A: ácido fórmico al 0,1%-agua, B: metanol. El procedimiento de elución en gradiente se muestra en la Tabla 1. Velocidad de flujo: 0,2 ml/min; temperatura de la columna 40 °C; volumen de inyección: 2 μl. Tabla 1 Tiempo del programa de elución en gradiente/min VA VB 0,0 90 10 2,0 90 10 5,0 10 90 7,0 10 90 7,5 90 10 10,0 90 10 7.3.2 Condiciones de referencia de espectrometría de masas Tipo de fuente de iones: ionización por electropulverización fuente; Escaneo método: Modo de monitoreo de reacciones múltiples (Monitoreo de reacciones múltiples, MRM) Cuando se mide la patulina, se utiliza el escaneo de iones negativos (ES-). Al medir las otras siete micotoxinas, se utilizó el escaneo de iones positivos (ES+). La información del espectro de masas del ion original y del ion producto de las ocho sustancias se muestra en la Tabla 2; Voltaje de electropulverización:
——2500 V, 3500 V; Temperatura de la fuente de iones: 350 °C ; Gas atomizador: 40 Arb; Gas auxiliar: 10 Arb. Tabla 2 8 tipos de micotoxinas Información del espectro de masas del ion precursor y del ion producto Nombre del compuesto Modo de ionización Ion precursor Energía de colisión del ion producto (V) Voltaje de desagrupación (V) Aflatoxina B1 Positivo 313,1 241,2*/269,2 29,47/30,15 161 Aspergillus B2 amarillo Positivo 315,1 259,0*/287,1 28,55/25,05 173 Aflatoxina G1 Positivo 329,1 214,5*/243,0 31,37/25,56 166 Aflatoxina G2 Positivo 331,1 245,1*/313,1 28,84/22 82 183 Och ratoxina A Positiva 402,1 167,0*/ 358,1 35,03/18,27 137 T-2 Toxina positiva 489,3 245,1*/327,1 26,23/22,61 189 Fumonisina B2 positiva 706,3 336,6*/353,1 37,10/31,16 169 Patulina negativa 153,0 109,1*/8 1,1 8,41/11,44 59 Nota: * indica cuantitativo mesa de iones. 7.3.3 Para dibujar la curva estándar de la matriz, seleccione una muestra en blanco con propiedades iguales o similares a las de la muestra a analizar y procese de acuerdo con los métodos de 7.1 y 7.2 para obtener una solución de matriz en blanco. Mida con precisión una cierta cantidad de solución intermedia estándar de patulina y solución intermedia estándar mixta, y use una solución de matriz en blanco para diluir gradualmente la concentración en masa de patulina a 0,050 μg/mL, 0,100 μg/mL, 0,150 μg/mL, 0,200 μg/mL. , 0,250 μg/mL, 0,500 μg/mL, las concentraciones en masa de las otras siete micotoxinas son 0,010 μg/mL, 0,020 μg/mL, 0,050 μg/mL, 0,100 Coincidencia de matriz Soluciones de trabajo en serie estándar de μg/mL, 0,200 μg/mL y 0,500 μg/mL. De acuerdo con el rendimiento del instrumento y las necesidades de detección, se seleccionan no menos de 5 puntos de concentración para el análisis mediante el espectrómetro de masas de cromatografía líquida de triple cuadrupolo. Dibuje la curva estándar con el área del pico del cromatograma del ion cuantitativo de cada componente a medir como ordenada y la concentración de la matriz correspondiente que coincide con la solución de trabajo de la serie estándar como abscisa. 7.3.4 Cualitativo y cuantitativo 7.3.4.1 Tiempo de retención El tiempo de retención del pico cromatográfico del componente probado debe estar cerca del tiempo de retención del pico cromatográfico estándar correspondiente, y el error relativo debe estar dentro de ±2,5%. 7.3.4.2 Relación de abundancia de iones Bajo las mismas condiciones experimentales, si el tiempo de retención del pico cromatográfico del componente probado en la muestra detectada y el tiempo de retención del pico cromatográfico estándar correspondiente cumplen con los requisitos de 7.3.4.1, y después de restar el Antecedentes En el espectro de masas de la muestra, aparecen los dos iones producto seleccionados del compuesto que se está probando, y en el mismo lote de detección y en el mismo compuesto, la relación de abundancia de los iones producto del compuesto que se está probando en la muestra es equivalente a la concentración en masa de los iones del producto de la solución estándar de la matriz. Si la desviación permitida no excede el rango especificado en la Tabla 3, se puede determinar que el compuesto probado está presente en la muestra. Tabla 3 Desviación máxima permitida de la relación de abundancia de iones durante el análisis cualitativo Relación de abundancia de iones >50 >20~50 >10~20 ≤10 Desviación permitida ±20 ±25 ±30 ±50 7.3.4.3 La cuantificación cuantitativa adopta una estandarización cuantitativa externa. 7.4 El experimento en blanco se llevará a cabo de acuerdo con las condiciones y procedimientos de medición anteriores, excepto que no se agregue ninguna muestra. 8 Cálculo del resultado La cantidad de residuos de micotoxinas en la muestra se calcula según la fórmula (1). bsp; (1) En la fórmula: /mL; m-masa de la muestra, g; V-volumen total de la solución de extracción de muestra, ml; conversión de 1000 unidades factor; Nota: Los resultados del cálculo conservan tres cifras significativas. 9 Precisión significa que la diferencia absoluta entre dos resultados de medición independientes obtenidos en condiciones de repetibilidad no es superior al 15% de la media aritmética. 10 Consulte el Apéndice A para ver los cromatogramas iónicos de las soluciones estándar de las otras ocho micotoxinas.
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