T/NAASS 059-2023 Especificación técnica para la detección de anticuerpos ELISA competitivos frente al virus respiratorio sincitial bovino (Versión en inglés)
Términos y definiciones Los siguientes términos y definiciones se aplican a este documento. Virus sincitial respiratorio bovino Virus sincitial respiratorio bovino, BRSV El virus sincitial respiratorio bovino es un virus de ARN monocatenario de sentido negativo que pertenece a la familia Paramyxoviridae y al género Pneumovirus. La infección del ganado lechero y de carne puede causar el síndrome de enfermedad respiratoria aguda. 3.2 Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas competitivo Ligado a enzimas competitivas La muestra y el conjugado enzimático, el anticuerpo correspondiente que contiene pueden competir con el antígeno y el conjugado enzimático en el portador para la unión, lavar los materiales no unidos y Conjugado de enzima unido competitivamente, agregue el sustrato de enzima y realice una reacción de color. Mida los anticuerpos. 4 Preparación de la prueba de ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas competitiva El entorno experimental, los instrumentos y equipos, la preparación de la solución de lavado, la preparación del diluyente y la preparación de la solución de trabajo del trazador se llevarán a cabo de acuerdo con las instrucciones del kit. El agua destilada para dilución debe cumplir con los requisitos de GB/T 6682. Para la muestra de prueba, se recogieron asépticamente 2 ml ~ 3 ml de sangre venosa bovina, se coaguló de forma natural durante 1 h ~ 2 h, se centrifugó a 1500 rpm/min ~ 2000 rpm/min durante 5 min y se recogió el suero en un tubo de centrífuga de 1,5 ml. Procedimiento de operación Antes de usar, devuelva todos los reactivos (excepto los conjugados) a temperatura ambiente (20 °C ~ 25 °C) y agite o gire suavemente para mezclar los reactivos de manera uniforme. 4.3.1 Retire la placa. Retire la microplaca y marque la posición de la muestra en la hoja de registro de operación. Si utiliza una porción de una microplaca, retire solo las tiras suficientes para detectar la muestra. Las tiras de micropocillos no utilizadas deben envolverse en papel de aluminio, mantenerse secas y selladas, y almacenarse entre 2 ℃ y 8 ℃. 4.3.2 Agregue la muestra de acuerdo con la concentración especificada en las instrucciones del kit, diluya la muestra de suero, agregue la muestra a analizar en cada pocillo y agregue controles negativos y positivos de acuerdo con la disposición de los pocillos de la placa. 4.3.3 Diluir el conjugado enzimático Utilice diluyente para diluir el conjugado enzimático hasta la cantidad requerida. 4.3.4 Agregue el conjugado enzimático Agregue el conjugado enzimático a cada pocillo y agite bien. 4.3.5 Después de sellar la microplaca, incúbela a 37°C. 4.3.6 Lavar la placa: Deseche el líquido de la microplaca y lave bien cada placa 6 veces con aproximadamente 300 µL de solución de lavado. Después de cada lavado, sacuda el líquido de cada pocillo de la placa. Durante el lavado y antes de agregar el siguiente reactivo, evite que la placa de reacción se seque y evite burbujas en los pocillos. Después de la última sacudida, agregue agua al material absorbente. Sujete la placa firmemente y absorba el líquido restante 4.3.7 Agregue sustrato Agregue la solución de sustrato a cada pocillo. Incubar a temperatura ambiente lejos de la luz. 4.3.8 Agregue solución de parada a cada pocillo para terminar la reacción. 4.3.9 Determine el valor de absorbancia (valor OD).Precaliente el lector de microplacas durante 15 minutos y lea el valor de absorbancia de la longitud de onda dentro de los 5 minutos posteriores a la adición de la solución de parada. La prueba de validez experimental sólo es válida cuando se cumplen las condiciones especificadas en las instrucciones del kit. Los resultados se calcularon utilizando la fórmula de cálculo especificada en las instrucciones del kit. Los resultados se evaluaron utilizando los criterios de evaluación especificados en las instrucciones del kit.
T/NAASS 059-2023 Historia
2023T/NAASS 059-2023 Especificación técnica para la detección de anticuerpos ELISA competitivos frente al virus respiratorio sincitial bovino