T/SDAA 0054-2021
Código Technicol de 12 tipos de residuos de agonistas β en alimentos de origen animal. Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (Versión en inglés)

Estándar No.

T/SDAA 0054-2021

Idiomas

Chino, Disponible en inglés

Fecha de publicación

2021

Organización

Group Standards of the People's Republic of China

Ultima versión

T/SDAA 0054-2021

Alcance

Especificaciones técnicas para la detección de fármacos agonistas de los receptores 12 β en alimentos para animales Especificaciones técnicas para cantidades residuales de fármacos agonistas beta.  Este documento se aplica al clenbuterol, albuterol, clorprenalina, terbutalina, tobuterol, bromuro, buterol, mapenterol y sibuterol en carne de cerdo, ternera y cordero. Determinación de los residuos totales de 12 fármacos beta-agonistas como, mabuterol, bambuterol, cimaterol. y fenoterol.  El límite mínimo de detección del método en este documento: El límite mínimo de detección de los residuos totales de 12 fármacos beta-agonistas en carne de cerdo, res y cordero es 1 μg/kg.  2 Documentos normativos de referencia El contenido de los siguientes documentos constituye disposiciones esenciales de este documento a través de referencias normativas en el texto. Entre ellos, para los documentos de referencia con fecha, solo se aplica a este documento la versión correspondiente a la fecha; para los documentos de referencia sin fecha, se aplica a este documento la última versión (incluidas todas las órdenes de modificación). GB/T 6682 Especificaciones de agua de laboratorio analítico y métodos de prueba GB/T 33411 Principios generales del kit de inmunoensayo ligado a enzimas 3 El principio utiliza el método ELISA de competencia indirecta, en la tira de micropocillos recubierta con clenbuterol Después de agregar el anticuerpo marcado con enzima, se desarrolla el reactivo para desarrollar color y detener la solución para terminar la reacción. Utilice un lector de microplacas para medir la absorbancia a 450 nm. El valor de absorbancia se correlaciona negativamente con la cantidad residual total de 12 fármacos agonistas de los receptores beta. Se puede obtener comparando con la curva estándar. 12 Cantidades residuales de fármacos betaagonistas. T/SDAA 0054-2021 4 Reactivos o materiales A menos que se especifique lo contrario, solo se utilizan reactivos analíticamente puros 4.1 Agua, GB/T 6682, Nivel 3 para los siguientes reactivos. 4.2 Hidróxido de sodio (NaOH) 4.3 Ácido tricloroacético (C2HCl3O2) 4.4 Solución de hidróxido de sodio: C(NaOH) = 1 mol/L, pesar el hidróxido de sodio (4.2) 40,0 g, agregar agua para disolver y ajustar a 1000 ml. 4.5 Solución de ácido tricloroacético: C(C2HCl3O2) = 10 g/L, pesar 10,0 g de ácido tricloroacético (4.3), agregar 1000 ml de agua para disolver y agitar bien. . 4.6 Kit de detección de agonistas β Almacenar a 2 ℃ ~ 8 ℃. 4.6.1 La especificación de la placa de 96 pocillos recubierta con antígeno de clenbuterol es 12 tiras × 8 pocillos. 4.6.2 Solución de trabajo de anticuerpos Clenbuterol 4.6.3 Solución de trabajo de etiquetado enzimático 4.6.4 20 Solución de lavado concentrada 4.6.5 Solución de sustrato Solución A 4.6.6 Solución de sustrato nbsp;B  ; solución 4.6.7 Solución de parada 4.6.8 Solución estándar de la serie Clenbuterol 6 gradientes de concentración, las concentraciones son 0 μg/l, 0,2 μg/l, 0,6 μg/l, 1,8 μg/l, 5,4 μg/ L, 16,2μg/L. 4.6.9 Solución de lavado), utilizada para lavar placas objetivo de enzimas. Almacenar a 2 ℃ ~ 8 ℃, válido por 1 mes. 4.6.10 Úselo dentro de los 5 minutos, evite usar recipientes metálicos y agitar la mezcla. 5 Instrumentos Lector ELISA 5.1 equipado con filtro de 450 nm. Pipeta de cantidad 5,2. 5.3 Velocidad de rotación del homogeneizador 10000 r/min ~ 15000 r/min. El microagitador T/SDAA 0054-2021 5.4 es adecuado para placas de 96 pocillos. 5,5 Mezclador Vortex 5,6 Equilibrio La capacidad de detección es 0,01 g. 5.7 Velocidad de centrífuga ≥4000 r/min. 6 Preparación de la muestra Las muestras se almacenaron en un refrigerador a -20 °C. Tome una muestra en blanco fresca o descongelada, córtela en pedazos, colóquela en un homogeneizador y homogeneícela a alta velocidad 10000 r/min ~ 15000 r/min durante 1 minuto. 7 Pasos del análisis 7.1 Procesamiento de la muestra Pesar la muestra 2 g ± 0,01 g en un tubo de centrífuga de 50 ml, agregar 4 ml de solución de ácido acético de tricloruro (4.5 ), mezclar bien ; centrifugar a 4000 r/min durante 5 minutos; tomar 1 ml de sobrenadante en un tubo de centrífuga nuevo, agregar 30 μl de solución de hidróxido de sodio (4.4), agitar durante 10 s y mezclar 400 0  Centrifugar a r/min durante 5 minutos y tomar 50 μl de sobrenadante para la detección. El factor de dilución es 2 veces. 7.2 Pasos de medición Coloque el kit a temperatura ambiente (19 ℃ ~ 25 ℃) durante 1 h ~ 2 h antes de usarlo. 7.2.1 Lleve a cabo al menos dos cálculos de prueba paralelos para cada solución estándar y solución de muestra, inserte la cantidad requerida de tiras marcadas con enzimas en la rejilla para placas y registre las posiciones de cada solución estándar y solución de prueba. 7.2.2 Agregue 50 μL de cada solución estándar (4.6.8) o solución de muestra en los micropocillos respectivos. 7.2.2 Agregue 50 μL de solución de trabajo de anticuerpos (4.6.2) en cada micropocillo, mezcle bien y reaccione 15 a temperatura ambiente (25 ℃ ± 2 ℃) lejos de la luz; mín. 7.2.3 Vierta el líquido de los pocillos, agregue 260 μl de solución de trabajo de lavado (4.6.9) a cada pocillo, lave minuciosamente 4 veces y remoje entre 15 y 30 segundos cada uno. tiempo. 7.2.4 Vierta el líquido de los pocillos, coloque la placa de etiquetado de enzimas boca abajo sobre papel absorbente y séquela; agregue inmediatamente 100 μL de solución de trabajo de etiquetado de enzimas (4.6.3) a cada pocillo, mezcle bien y reaccione. a temperatura ambiente (25 ℃ ± 2 ℃) alejado de la luz durante 15 minutos. 7.2.5 Repita los pasos 7.2.3; De manera uniforme, reaccione a temperatura ambiente (25 ℃ ± 2 ℃) y lejos de la luz durante 15 min a 20 min. 7.2.7 Medir la absorbancia. T/SDAA 0054-2021 7.3 Prueba en blanco Tome el blanco proporcionado en el kit y siga los pasos de determinación 7.2. 7.4 Prueba de control de calidad Cada medición debe realizarse con una muestra de control de calidad y se agrega una muestra en blanco a la solución estándar.   8 BB0×100% ………………(1) Donde: Ar  　——valor de absorbancia relativa, %; ;B0—el valor de absorbancia promedio del blanco. Los resultados del cálculo conservan 3 cifras significativas. 8.2 Dibuje la curva estándar Tome el valor de absorbancia relativa (%) como ordenada, tome el logaritmo natural de la concentración de cada solución estándar (μg/L) como abscisa y dibuje la curva estándar en la semi. -coordenada logarítmica. Es necesario dibujar una nueva curva estándar para cada prueba. 8.3 Cálculo de los resultados de la muestra La cantidad total de residuos del fármaco agonista β en la muestra se expresa mediante: X = C μg/L); n: factor de dilución de la muestra.  Los resultados del cálculo conservan tres cifras significativas. T/SDAA 0054-2021 9. Reactividad cruzada Clenbuterol: 100%.  Clorprenalina: 141% Tobuterol: 80% Bromebuterol, mapenterol: 107% Sibuterol: 86,9%. Albuterol: 60,6%. Mabutero: 56,3%.  Terbutalina: 33,1%.  Bambutero: 18%.  Cimatro: 14%. Fenoterol: 10,6%. 10. Precisión 10.1 Sensibilidad El límite de detección de residuos totales de fármacos agonistas β en muestras de carne de cerdo, res y cordero mediante este método es de 1 μg/kg. 10.2 Precisión La tasa de recuperación de este método es del 60 % al 120 % a un nivel de concentración añadido de 1 μg/kg a 10 μg/kg. 10.3 Precisión El coeficiente de variación intralote de este método es ≤20% y el coeficiente de variación entre lotes es ≤30%.

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• 2021 T/SDAA 0054-2021 Código Technicol de 12 tipos de residuos de agonistas β en alimentos de origen animal. Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas