(1) Ámbito de aplicación de la norma Esta norma especifica los procedimientos de inspección de calidad y clasificación de las semillas de Bupleurum chinense DC. Esta norma se aplica al establecimiento y aplicación (clasificación de calidad, cultivo y producción, transacciones de mercado, etc.) de normas de clasificación de calidad de semillas para la planta Umbelliferae Bupleurum chinense DC. (2) Argumentos pertinentes para el establecimiento de normas. Las semillas se utilizan básicamente como material de propagación en el cultivo y producción de Bupleurum chinensis. La calidad de las semillas afecta directamente el rendimiento y la calidad de los materiales medicinales de Bupleurum chinensis. Para ello, es necesario investigar y medir el uso de semillas en las principales bases de siembra de Northern Bupleurum, y realizar investigaciones sobre los estándares de calidad de las semillas de Northern Bupleurum. 1. Recolección de muestras de semillas de Northern Bupleurum: se recolectaron 36 semillas de Northern Bupleurum desde octubre de 2017 hasta noviembre de 2018, incluidas semillas de la variedad Zhongchai No. 2 de diferentes orígenes y años en Hebei y Beijing, Changzhi, Yuncheng, Yangcheng, Shanxi. vendido por agricultores y pequeñas tiendas en zonas productoras de Bupleurum como Wenxi. 2. Método de prueba 2.1 Utilice el método de reducción a la mitad con las manos desnudas para recolectar directamente las muestras para su inspección. Los pasos son los siguientes: Vierta la muestra de semilla sobre una superficie lisa, use un raspador para mezclar la muestra verticalmente y luego horizontalmente, y repita la mezcla 4 veces. Luego divide las semillas en dos partes y vuelve a dividir cada parte por la mitad para obtener 4 partes. Luego divide cada sección en dos nuevamente, terminando con 8 secciones. Fusiona y mantén las partes entrelazadas y quita las 4 partes restantes. Repita los pasos de muestreo anteriores hasta que la calidad de las semillas sea consistente con la calidad de las muestras enviadas para inspección. 2.2 Los pasos para el análisis de claridad son los siguientes: (1) Pesar el peso total de las muestras enviadas para inspección, registrado como M. Compruebe si las muestras enviadas para inspección contienen contaminantes pesados, como terrones de tierra, piedras o semillas grandes mezcladas con semillas pequeñas. Si hay una mezcla pesada, sáquela y pésela, registrándola como m. Luego separe las semillas de otras plantas y las impurezas de la mezcla pesada. La masa de las semillas de otras plantas se registra como m1 y la masa de las impurezas se registra como m2. (2) Utilice un plato divisor de muestras para tomar una muestra completa (que contenga aproximadamente 2500 granos) de las muestras enviadas para inspección después de seleccionar los contaminantes pesados, y pese la masa de la muestra. Vierta la muestra en el banco de análisis y separe las semillas limpias, otras semillas de plantas y las impurezas. Durante la separación se pueden utilizar tamices y las sustancias que son difíciles de separar con tamices se separan manualmente. Luego coloque las partes separadas en los contenedores correspondientes. (3) Calcule el contenido de semillas netas, otras semillas de plantas e impurezas en la muestra respectivamente y regístrelos como P1, OS1 e I1 respectivamente. El dividendo durante el cálculo es la suma de las masas de los tres componentes. La suma de las masas de los tres componentes no puede ser mayor al 5% de la muestra original. Para calcular el contenido de cada ingrediente, la fórmula de cálculo es la siguiente: Semillas netas (P2): P2 (%) = P1 × (Mm)/M Otras semillas de plantas (OS2): OS2 (%) = OS1 × (Mm) /M + m1/M ×100 Impurezas (I2): I2 (%) = I1 × (Mm)/M + m2/M × 100 La comprobación final debe ser: (P2 + OS2 + I2) = 100,00%. Redondeo: primero verifique si la suma de cada componente es 100,0%. Los errores inferiores al 0,05% se pueden ignorar. Si la suma es 99,9% o 100,1%, entonces suma o resta 0,1% del valor más bajo. Si el valor de redondeo es superior al 0,1%, se debe comprobar si hay errores en el cálculo. 2.3 Los materiales para medir el peso son B-1~B-5, que son semillas de Zhongchai No. 2 de diferentes orígenes y años, a saber: Wangdu, Hebei en 2018, Wangdu, Hebei en 2017, Sitio Experimental del Cultivo de Plantas Medicinales de Beijing. en 2018 y 2017. Sitio de prueba de cultivo del Instituto de Plantas Medicinales de Beijing, Baoding, provincia de Hebei en 2017, muestras netas de semillas. El Reglamento de inspección de semillas de cultivos de mi país (GB/T3543.1~3543.7-1995) estipula que los métodos para medir el peso de las semillas en mil granos incluyen el método de los cien granos y el método de los mil granos. En este experimento, se utilizaron los dos métodos anteriores para determinar el peso de mil granos de las semillas de Bupleurum chinensis. Los pasos son los siguientes: (1) Método de los cien granos: tome las semillas limpias de B-1 a B-5 y mida los mil -Peso de grano de cada muestra dos veces utilizando el método de los cien granos. Es decir, contar aleatoriamente 100 semillas de cada muestra, repetir 8 veces y pesarlas por separado; luego contar 100 semillas nuevamente, repetir 8 veces y pesarlas por separado. El resultado del pesaje tiene una precisión de 0,001 g. Calcule la media, la desviación estándar y el coeficiente de variación para cada método de cien granos. (2) Método de los mil granos: tomar semillas limpias de B-1 a B-5 y medir el peso de mil granos de cada muestra dos veces utilizando el método de los mil granos. Es decir, tomar al azar 1.000 semillas de cada muestra, repetirlo dos veces y pesarlas por separado; calcular el valor medio y la diferencia entre repeticiones; medir el peso de cada muestra después del secado para calcular el contenido de humedad real, con un 10% como Regla Contenido de humedad, calcule el peso de mil granos en condiciones de humedad específicas. El resultado del pesaje tiene una precisión de 0,001 g. 2.4 Los materiales de prueba de determinación de humedad son semillas limpias recolectadas de semillas en Yuncheng, Shanxi y otros lugares. De acuerdo con el "Reglamento de inspección de semillas de cultivos", los métodos para medir la humedad de las semillas incluyen el método de secado a alta temperatura constante y el método de secado a baja temperatura constante. En este experimento, se utilizaron los dos métodos anteriores para determinar la humedad de la semilla de Bupleuri chinensis. Los pasos para el secado a temperatura alta y constante son los siguientes: (1) Tome 5 g de semillas limpias de cada porción y repita 2 veces. (2) Tome una caja de aluminio limpia y colóquela en un horno a 130 °C para que se seque previamente durante 1 hora. Pasada 1 hora, saca la caja de aluminio y ponla en un desecador para que se enfríe y seque durante 30 minutos. Después de enfriar, pesar la caja de aluminio, agregar las semillas y pesar el peso total. (3) Coloque la caja de aluminio en un horno a 130 ° C. Saque la caja de aluminio cada 0,5 horas y colóquela en un desecador para que se enfríe y luego pésela hasta que se seque durante un total de 3 horas. (4) Calcule la humedad de la semilla medida después de cada secado. Todos los resultados de pesaje tienen una precisión de 0,001 g. La diferencia entre réplicas de una misma muestra no puede exceder el 0,2%. Los pasos del método de secado a baja temperatura constante son los mismos que los del secado a alta temperatura constante, la diferencia es que la temperatura de secado de las semillas es de 103°C y el tiempo de secado es de 17 horas. 2.5 Identificación de autenticidad: Tome 400 semillas de cada una de Zhongchai No. 2, Beibubupleurum producido en Shanxi, Sandao Bupleurum, Yinzhou Bupleurum y semillas de Bupleurum de hoja estrecha, y mida su largo y ancho con un pie de rey. Luego se observaron las semillas bajo un estereomicroscopio y se registraron y fotografiaron las características morfológicas de las semillas. 2.6 Prueba de germinación Se estudiaron el lecho de germinación adecuado, la temperatura de germinación adecuada, el tiempo de conteo inicial y el tiempo de último conteo de la prueba de germinación, así como los criterios de evaluación para plántulas normales y anormales de Bupleurum chinensis. Selección del lecho de germinación: Realice pruebas de germinación utilizando arena y papel (agregue una esponja de 0,5 cm debajo de dobles capas de papel de filtro para hidratar). Cada día se contó el número de semillas germinadas, la longitud de la radícula fue ≥2 mm y se registró como germinación el crecimiento de dos cotiledones. Selección de temperatura de germinación: utilice el método de germinación en papel (agregue una esponja de 0,5 cm para hidratar debajo de papel de filtro de doble capa) para realizar una prueba de germinación. Establezca la temperatura constante en 15, 20, 25, 30 y la temperatura variable en 15. a 25°C (25°C durante 8 horas, 15°C durante 16 horas) 20～30℃(30℃8h, 20℃16h). Cada tratamiento se replicó 6 veces, con 100 semillas por repetición. Después de enjuagar las semillas con agua del grifo durante 10 minutos, se colocaron en una cama y se colocaron en una incubadora para que germinaran. Después de la germinación, se registró el número de semillas germinadas todos los días y se observó hasta el día 35. Cuente la cantidad de semillas germinadas todos los días. Tiempo de conteo de la prueba de germinación: germinación en papel, cambiando la temperatura a 25 ℃ durante 8 h y 15 ℃ durante 16 h. Cuente la cantidad de semillas germinadas todos los días. Estándares de evaluación de plántulas: Después de la prueba del tiempo de conteo de germinación, observe la morfología de las plántulas y determine la morfología normal y anormal de las plántulas según las "Directrices de implementación para procedimientos de inspección de semillas de cultivos GB/T3543.1~3543.7-1995". 1.2.7 Estudio de determinación de la viabilidad El método para determinar la viabilidad de las semillas de Bupleurum chinensis mediante tinción con tetrazolio incluye el método de humectación previa, el tratamiento previo al teñido, la concentración de la solución de tetrazolio y el tiempo de teñido, y los estándares de identificación de la morfología del teñido. Método de prehumedecimiento: 400 semillas cada una, colocadas en placas de Petri de 15 cm, agregue la cantidad adecuada de agua destilada para remojar. Observe la absorción de agua de las semillas y el ablandamiento de la testa. Tratamiento previo al teñido: las semillas de Bupleuri se componen de cubierta seminal, endospermo y embrión. Antes de teñir, corte de 1/3 a 1/2 del extremo de la semilla (el extremo del tallo del fruto) y luego córtelo por la mitad. a lo largo de la línea media y toma la mitad teñida. Concentración de la solución de tetrazolio y tiempo de teñido: Tome 200 semillas de Zhongchai No. 1, sumérjalas en agua durante 16 horas y humedézcalas previamente para teñirlas. Tome 4 placas de Petri limpias de 9 cm, coloque 50 semillas en cada una y vierta una solución de TTC al 0,5% o al 1,0%. Cada tratamiento se replicó 2 veces. Teñir en la oscuridad a 30°C. Después de 8 horas de teñido, las semillas estaban ligeramente rojas. Después de eso, se tomaron aleatoriamente 20 semillas de soluciones de TTC al 0,5% y 1,0% cada 2 horas y se fotografiaron al microscopio para registrar la profundidad de la tinción hasta 18 horas después del teñido. Identificación de la morfología de la tinción: las semillas de Bupleuri cuya sección de endospermo y embrión están teñidos de rojo brillante y tienen un estado de tejido normal son semillas normales y viables; de lo contrario, son semillas no viables. Identificación de la morfología del teñido: tomar 400 semillas de Zhongchai No. 1, remojarlas en agua, humedecerlas previamente durante 16 horas y realizar un tratamiento previo al teñido. Poner en una placa de Petri de 9 cm, 50 granos por placa, verter solución de TTC al 0,1%, 0,3%, 0,5%, 0,7% y teñir durante 18 horas a 30°C en la oscuridad. Después de teñir, vierta y limpie la solución de tinte restante en la superficie de las semillas, luego coloque las semillas bajo un estereomicroscopio para observar la morfología del teñido y clasificarlas para determinar las formas de semillas viables y no viables, y luego tomar fotografías de ellas. . Determine la viabilidad de la semilla basándose en estándares de identificación morfológica de tinción tentativa. Elija al azar 8 semillas, 400 cada una, y mida su viabilidad utilizando el método anterior. Al mismo tiempo, haga una prueba de germinación en papel (agregue una esponja de 0,5 cm debajo de una doble capa de papel de filtro para hidratar) y cuente la tasa de germinación. Analice la correlación entre la viabilidad medida y la tasa de germinación para determinar si el estándar de identificación morfológica de tinción es exacto. 3 Resultados y análisis 3.1 El muestreo y el análisis de pureza determinaron que el peso del lote de semillas de Bupleurum estaba dentro de los 1000 kg, y se determinó que el peso mínimo del lote de semillas de Bupleurum era de 50 g. El peso de las muestras enviadas para inspección varía según los elementos de prueba. El peso de las muestras enviadas para inspección varía dependiendo de los elementos de prueba. Dado que el método de secado a alta temperatura se utiliza para medir el contenido de humedad de las semillas de Bupleurum sin triturar, y el tamaño de la muestra es de 5 g, el peso mínimo de las muestras enviadas para inspección La inspección determina que es de 50 g, que es suficiente para garantizar la medición de todas las necesidades. Se estima que el tamaño de la muestra para el análisis de claridad contiene al menos 2500 unidades de semillas. El peso de 1000 semillas de Bupleurum chinensis es de aproximadamente 1,1 g. El peso de 2500 semillas es (1,1×2500)/1000=3,0 (g). Determinar la muestra de análisis de pureza de Bupleurum. El peso mínimo es 6 g. Utilice el método de reducción a la mitad con las manos desnudas para tomar dos muestras completas de cada muestra de Bupleurum. Separe las muestras en tres componentes: semillas limpias, semillas de otras plantas e impurezas generales, y luego péselas respectivamente, expresadas en g. Sume el peso de cada componente de cada muestra para calcular el porcentaje de cada componente. Si la diferencia entre el peso posterior al análisis y el peso original excede el 5% del peso original, vuelva a analizar. La precisión del pesaje de las muestras y el cálculo del porcentaje se refiere al Reglamento Internacional de Inspección de Semillas. Mediante el análisis de la pureza de 9 muestras de semillas de Bupleurum de diferentes procedencias, se puede observar que 3 de las 9 muestras tienen una pureza del 75% al 80%, 2 muestras tienen una pureza del 80% al 90% y 4 Las muestras tienen una pureza del 75% al 80%, más del 90% de las muestras y el error de cada muestra no supera el 2% (Tabla 1). Tabla 1 Pureza de muestras de semillas de Bupleurum chinensee Número de muestra Peso original (g) Semillas netas (g) Otras semillas (g) Impurezas (g) Peso después del análisis (g) Claridad (%) Error (%) CHHU0152 6,096 4,510 0,0173 1,450 5,977 75,5 2,0 CHHU0153 6,117 5,861 0,0425 0,1973 6,101 96,1 0,3 CHHU0161 6,002 4,766 0,0020 1,211 5,979 79,7 0,4 CHHU0162 6,001 5 ,328 - 0,5736 5 .902 90.3 1.7 CHHU0186 6.001 5.577 - 0.3634 5.941 93.9 1.0 CHHU0187 6.001 5.830 - 0.0966 5.927 98.4 1.2 CHHU0199 6.204 5 .098 0.0045 1 .042 6.144 83,0 1,0 CHHU0200 6,096 4,818 0,0008 1,206 6,025 80,0 1,2 Nota: "-" significa que no hay otras semillas de plantas 3,2 Peso de mil semillas El peso de diferentes lotes de semillas de Beibubupleurum (semillas de Zhongchai No. 2 producidas en diferentes áreas de producción y diferentes años) se determinó mediante el método de 100 semillas, y el peso entre repeticiones. Si el coeficiente de variación es mayor a 4.0, el resultado no es confiable y no puede usarse para determinar el peso de mil granos de las semillas de Bupleuri chinensis (Cuadro 2). Cuadro 2 Determinación del peso de mil semillas de Bupleurum chinense por el peso de 100 semillas Número de muestra Número medio de determinaciones (g) Desviación estándar (S) Coeficiente de variación (CV) Si el coeficiente de variación es inferior a 4,0 Peso de mil semillas (g) B-1 La primera vez 0,1136 0,0038 3,3827 Sí 1,1359 La segunda vez 0,107 0,0033 3,1241 Sí 1,0704 B-2 La primera vez 0,1085 0,0040 3,7181 Sí 1,0848 La segunda vez 0,1121 0,0031 2,7531 Sí 1,1213 B-3 La primera vez 0,1201 0,0045 3,7605 es 1.2009 2da vez 0.1214 0.0026 2.1586 es 1.2141 B- 4 La primera vez 0.1277 0.0027 2.1107 es 1.2769 La segunda vez 0.1266 0.0024 1.9116 es 1.2658 B-5 La primera vez 0.1289 0,0049 3,7922 es 1,2885 La segunda vez 0,1298 0,0048 3,6876 es 1,2983 Nota: Una La medición en la tabla se refiere a la determinación de semillas utilizando el método de las 100 semillas. Se pesan mil semillas una vez, es decir, se cuentan 100 semillas cada vez, se repite el conteo 8 veces y se pesan. Se utilizó el método de los mil granos para determinar el peso de las semillas de Bupleurum chinensis. La relación entre la diferencia entre las réplicas y la media fue inferior al 5%. Los resultados fueron confiables y pudieron usarse para determinar el peso de 1000 granos de Bupleurum chinensis. semillas (Cuadro 3). Cuadro 3 Determinación del peso de mil semillas de Bupleurum chinense por el peso de 1000 semillas mediante el método de las mil semillas Cuadro 3 Determinación del peso de 1000 semillas de Bupleurum chinense por el peso de 1000 semillas Número de muestra Tiempos de medición Peso real medido de mil semillas (g) Valor medio (g) Diferencia entre réplicas/media Diferencia entre réplicas/media si es inferior al 5% Peso de mil semillas después del secado (g) Peso de mil granos (g) B-1 La primera vez 1,1118 1,1106 0,0022 es 1,0336 1,1480 La segunda vez 1.1094 es 1.0328 B-2 La primera vez 1.1005 1.0969 0.0066 es 1.0398 1.1500 La segunda vez 1.0933 es 1.030 2 B-3 Primera vez 1.2237 1.2217 0.0033 Sí 1.1532 1.2801 El segunda vez 1,2197 es 1,1510 B-4 La primera vez 1,2755 1,2711 0,0069 es 1.1027 1.2716 La segunda vez 1.2667 es 1.1861 B-5 La primera vez 1.3083 1.3036 0.0072 es 1.227 8 1.3563 La segunda vez 1.2989 es 1.2136 Nota: Una medida en la tabla Se refiere a aplicar el método de los mil granos para determinar los mil granos peso de las semillas una vez, es decir, contando 1.000 semillas cada vez. Peso de mil semillas (humedad especificada, g) = 3,3 Determinación de humedad: Los cambios en el contenido de humedad de 7 semillas de Bupleurum se midieron utilizando el método de pérdida de peso por secado. En condiciones de secado a alta temperatura constante (130 °C), el contenido de humedad de las semillas se perdió rápidamente en la primera 1,0 h, 1,0 La pérdida de peso de agua se ralentizó después de 1,5 horas y permaneció básicamente sin cambios a las 1,5 horas (Figura 1). Por lo tanto, el contenido de humedad de las semillas de Bupleurum chinensis se puede medir secándolas a una temperatura alta y constante durante 1,5 horas. Figura 1 Determinación del contenido de humedad de semillas de Bupleurum chinense mediante el método de secado a temperatura constante alta (130 ℃) Figura 1 Determinación del contenido de humedad de semillas de Bupleurum chinense secándose a 130 ℃ Comparación del efecto de secado del secado a temperatura constante alta durante 1,5 h y a temperatura constante baja ( 103 ℃) secado durante 17 h, el contenido de humedad medido por el método de secado a alta temperatura constante es mayor que O el método de secado a baja temperatura constante es básicamente el mismo, pero la relación entre el contenido de humedad de cada muestra medido por cada método es básicamente la misma (Figura 2). Figura 2 Comparación del contenido de humedad de semillas de Bupleurum chinense secadas a 130 ℃ y 103 ℃ En resumen, se utilizó el secado a 130 ℃ durante 1,5 h para determinar el contenido de humedad de las semillas de Bupleurum chinensis. 3.4 Identificación de autenticidad Las semillas de las plantas de Bupleurum son frutos colgantes dobles, ovalados, con lados planos, superficie de la comisura encogida, superficie marrón y ligeramente rugosa, superficie de corte casi semicircular o pentagonal, tubos de aceite que rodean el endospermo y el endospermo. redondo, la superficie ventral es recta y el embrión es pequeño. No hay informes de que las semillas de Bupleurum se confundan fácilmente con semillas de plantas. Observamos las semillas de Sandao Bupleurum, Yinzhou Bupleurum (área de producción de Gansu), Beibubupleurum (área de producción de Shanxi) y la variedad North Bupleurum Zhongchai No. 2 (Beijing). Hay poca diferencia entre las semillas de diferentes especies de Bupleurum. Las semillas de Yinzhou Bupleurum y Beibupleurum generalmente no tienen escamas, mientras que casi todas las semillas de Sandao Bupleurum tienen escamas densas y una pequeña cantidad de semillas de Zhongchai No. 2 tienen escamas. Las semillas de Yinzhou Bupleurum son cortas y gruesas achatadas, las semillas de Northern Bupleurum son delgadas y de color oscuro, mientras que las semillas de Mishima Bupleurum y Zhongchai No. 2 son grandes, regordetas y de color relativamente claro. Las semillas de Bupleurum angustifolia son más delgadas en comparación. Bupleurum es una umbela compuesta, que madura en etapas, la apariencia de las semillas está relacionada con la madurez de las semillas, la ubicación en la planta, los años de crecimiento de las plantas, la estación en la que maduran las semillas, etc. Las semillas recolectadas en diferentes áreas de producción de Zhongchai No. 2 están relacionadas entre sí y tienen diferencias de color, tamaño y forma. En términos generales, las semillas de Bupleurum chinense DC miden aproximadamente 3 mm de largo y 1 mm de ancho, de color tostado o marrón oscuro, acanaladas, lisas o escamosas en la superficie, ligeramente dobladas en forma de media luna. Figura 3 Varias semillas comunes de Bupleurum en producción (Sandao Bupleurum; Yinzhou Bupleurum; Beibu Bupleurum; Beibu Bupleurum variedad "Zhongchai No. 2"; Bupleurum angustifolia) Figura 3 Semillas de Bupleurum falcatum, Bupleurumyinchowense, Bupleurumchinense, cv. ZhongchaiNo.2 y Bupleurumscorzonerifolium 3.5 Prueba de germinación Selección del lecho de germinación: las semillas de Bupleurum germinan lentamente y es probable que algunas semillas transporten bacterias en el lecho de germinación de papel de filtro de doble capa, lo que afectará fácilmente las estadísticas de la tasa de germinación. Por lo tanto, comparamos la aplicación del lecho de germinación de papel de filtro de doble capa. (según el período de bacterias), las tasas de germinación se midieron en dos lechos de germinación (reemplazo de papel de filtro) (método del papel) y lecho de arena (método de la arena), como se muestra en las Figuras 4 y 5. Las tasas de germinación de diferentes semillas en los dos lechos de germinación son ligeramente diferentes, básicamente iguales o ligeramente diferentes, pero es obvio que el uso de un lecho de arena puede evitar problemas de contaminación bacteriana. En la prueba se encontró que básicamente todas las semillas de Bupleurum analizadas tienen serios problemas de contaminación bacteriana, por lo tanto, aunque las semillas de Bupleurum son semillas pequeñas (teóricamente, la mayoría de las semillas pequeñas son adecuadas para camas de papel), la prueba de germinación es adecuada para usar el Método de arena en lecho de arena. Figura 4 Comparación de la tasa de germinación de semillas de Bupleurum chinense en lecho de papel y lecho de arena Figura 4 Comparación de la germinación de semillas de Bupleurum chinense en papel de filtro y en arena Figura 5 Germinación de semillas de Bupleurum chinense en lecho de papel (sin cambiar el papel de filtro y reemplazando el papel de filtro) y lecho de arena Temperatura constante 15, 20, 25, 30, temperatura variable 15~25℃ (8h a 25℃, 16h a 15℃), 20~30℃ (8h a 30℃, 16h a 20℃). Cada tratamiento se replicó 6 veces, con 100 semillas por repetición. Después de enjuagar las semillas con agua del grifo durante 10 minutos, se colocaron en una cama y se colocaron en una incubadora para que germinaran. El número de semillas germinadas se registró todos los días después de la germinación (la germinación se registró cuando la longitud de la radícula fue ≥2 mm) y se observó hasta el día 35 (Tabla 3). Para Northern Bupleurum producido en Shanxi, en comparación con la temperatura de germinación constante, el tratamiento de temperatura variable de 15~25℃ o 20~30℃ promovió significativamente la germinación de las semillas. En las mismas condiciones cambiantes de temperatura, la tasa de germinación de la variedad Northern Bupleurum "Zhongchai No. 1" También es muy alto. En comparación con el Northern Bupleurum producido en Shanxi, Zhongchai No. 1 tiene un rango de temperatura de germinación más amplio y las tasas de germinación a temperaturas constantes y variables son más altas bajo temperaturas adecuadas. En resumen, las condiciones de temperatura adecuadas para la germinación de Bupleurum chinensis son: temperatura variable de 25°C por 8 horas, 15°C por 16 horas, o 30°C por 8 horas y 20°C por 16 horas. Tabla 4 Tasa de germinación y fecha de inicio de las semillas de Bupleurum chinensee a diferentes temperaturas Tabla 4 Tasa de germinación y fecha de inicio de las semillas de Bupleurum chinense a diferentes temperaturas Temperatura de germinación/℃ Variedad Northern Bupleurum "Zhongchai No. 1" Northern Bupleurum (producida en Shanxi ) Tasa de germinación (%) Fecha de inicio de la germinación ( d) Tasa de germinación (%) Días de inicio de la germinación (d) 15 93,8a 8ab 14,9c 14,2c 20 95,5a 7,3b 32,3b 11c 25 91,9a 6,7b 25,1b 17,8b 30 74,7 b 8.7a 0.0d >35a 15~ 25 94.8a 8ab 77.0a 11.8c 20~30 94.6a 8ab 76.3a 12c Nota: Las letras después de los valores de tasa de germinación en la tabla indican la importancia de la diferencia (significación del 5%). nivel, utilizando el método de diferencia menos significativa modificado), donde si hay una misma letra marcada, la diferencia no es significativa, y si no hay una misma letra marcada, la diferencia es significativa. Determinación del tiempo de conteo inicial y del último conteo en la prueba de germinación: CH024 (Zhongchai No. 2) comenzó a germinar el día 7 y el número de plántulas se volvió constante el día 22; mientras que otro germoplasma (producido en Shanxi ) comenzó a germinar desde el día 12 hasta el día 22. La germinación comenzó el día 15 y el número de plántulas permaneció básicamente constante el día 35. La dinámica de germinación de las semillas de Bupleurum chinensis se muestra en la Figura 6. Con base en una consideración exhaustiva de diferentes muestras de germoplasma cultivado, se determinó que el tiempo de conteo inicial de la prueba de germinación de semillas de Bupleuri chinensis fue el día 7 y el último tiempo de conteo fue el día 35. Figura 6 Variación de la germinación de semillas de Bupleurum chinense con el tiempo Figura 6 Variación de la germinación de semillas de Bupleurum chinense con el tiempo Criterios de evaluación para plántulas normales y plántulas anormales: Las plántulas normales tienen raíces principales largas y son blancas. Después de la germinación, la mayoría de las semillas viables de Bupleuri son plántulas normales y solo unas pocas plántulas son plántulas anormales. La morfología de las plántulas germinadas se muestra en la Figura 7. Las plántulas de Northern Bupleurum son plántulas del tipo cotiledón desenterradas. Después de que la semilla germina, la radícula y el hipocótilo se alargan y los cotiledones pierden sus cubiertas seminales y gradualmente se vuelven verdes. Figura 7 Germinación anormal (A y B) y normal (C y D) de semillas de Bupleurum chinense. Los estándares de evaluación para semillas de Bupleurum chinense son los siguientes: Plántulas normales: A Plántula completa: La plántula tiene dos manchas verdes casi angostas. Los cotiledones e hipocótilos son completa y erguida, la raíz principal es larga y blanca, y las plántulas en general están sanas y bien proporcionadas. B Plántulas con defectos leves: Algunos cotiledones de las plántulas están dañados, pero otras partes son normales. Las plántulas en general se ven sanas y bien proporcionadas. C Plántulas infectadas secundariamente: tienen características de plántula completa o tienen defectos leves, y están infectadas por bacterias u hongos, pero se puede identificar que las bacterias patógenas no provienen de las semillas mismas. Plántulas anormales: A-Plántulas perdidas: La raíz principal de la plántula no se alarga y tiene solo una raíz más corta. B plántulas malformadas: Las plántulas tienen sistemas de raíces cortas y los cotiledones no pueden atravesar la cubierta de la semilla; solo queda un cotiledón y la punta del tallo está dañada. C. Plántulas que se pudren por sus propios motivos. 3.6 Método de prehumedecimiento para determinar la viabilidad: la temperatura de prehumedecimiento es de 20 ° C. El agua absorbida por las semillas de Bupleurum después de remojar durante 1,5 horas alcanzará más del 50% del peso de la semilla seca, y el agua absorbida después de remojar durante 21 horas alcanzará el 90% del total de agua absorbible.Arriba, considerando un ciclo de trabajo de un día, se determina que el tiempo de prehumedecimiento de las semillas de Bupleurum es de 16 horas. Tratamiento previo al teñido: las semillas de Bupleuri se componen de cubierta seminal, endospermo y embrión. Antes de teñir, corte de 1/3 a 1/2 del extremo de la semilla (el extremo del tallo del fruto) y luego córtelo por la mitad. a lo largo de la línea media y toma la mitad teñida. Concentración de la solución de tetrazolio y tiempo de teñido: las semillas de Bupleurum chinensis se tiñen en diferentes tonos en soluciones de tetrazolio de diferentes concentraciones. Las semillas son ligeramente rojas en soluciones de TTC al 0,1% y 0,3%; se tiñen de rojo brillante en una solución de TTC al 0,5%; y son de color rojo intenso en una solución de TTC al 0,7%. Por lo tanto, utilice una solución de TTC al 0,5% para teñir. Las semillas de Bupleuri se tiñeron en una solución de TTC al 0,5% y se profundizaron gradualmente a medida que aumentaba el tiempo de teñido. Después de teñir a 30°C durante 18 horas, la sección de endospermo y el embrión se tiñeron de rojo brillante. Identificación de la morfología de la tinción: las semillas de Bupleuri cuya sección de endospermo y embrión están teñidos de rojo brillante y tienen un estado de tejido normal son semillas normales y viables; de lo contrario, son semillas no viables. Figura 8 Morfología de las semillas de Bupleurum chinense teñidas Figura 8 Semillas de Bupleurum chinense teñidas por TC Se ha verificado que la viabilidad medida por el método anterior y la tasa de germinación medida por la prueba de germinación tienen una correlación lineal obvia, como se muestra en la Figura 9. Por lo tanto, este estándar de juicio es preciso y confiable. Figura 9 Correlación de viabilidad y tasa de germinación Figura 9 Correlación de viabilidad y tasa de germinación 4. Estudio sobre los estándares de clasificación de calidad de semillas de Bupleurum chinensis. Se seleccionaron como indicadores de calidad de semilla la pureza, el peso de mil granos, la humedad y la tasa de germinación de las muestras. calificación de calidad. 4.1 Determinación de la claridad El rango de pureza de las semillas de Bupleuri varía del 49.50% al 97.80%, con un valor promedio de 81.32%, entre ellas 1 semilla tiene una pureza menor al 50.00% y 4 semillas tienen una claridad mayor al 90.00% (Tabla 5). Tabla 5 Pureza de muestras de semillas de Bupleurum chinensee N.° de muestra Diferencia de ganancia y pérdida de claridad N.° de muestra Diferencia de ganancia y pérdida de claridad CHSZ6 77,91 % 0,01 % ZC2-3 82,00 % 0,00 % CHSZ2 78,16 % 0,01 % CHSZ12 97,80 % 0,00 % CHSZ7 68,94 % 0. 01 % CHSZ10 83,80% 0,00% CHSZ5 72,64% 0,01% CHSZ11 82,20% 0,00% CHSZ4 87,95% 0,00% CHSZ13 57,20% 0,00% CHSZ1 49,50% 0,00% CHSZ20 75,80% 0,00% CHSZ 3 95,00% 0,00% CHSZ14 89,60% 0,00% ZC2-1 89,00 % 0,00% CHSZ15 93,80% 0,00% ZC2-2 95,70% 0,00% CHSZ16 86,70% 0,00% 4.2 Determinación del peso de mil granos El peso de mil granos de las semillas de Bupleurum chinensis oscila entre 0,673 g y 1,4765 g, con un valor promedio de 1,043 g . Hay 9 semillas cuyo peso de mil granos es inferior a 1,00 g, 7 semillas cuyo peso de mil granos es inferior a 0,9 g y una semilla cuyo peso de mil granos es inferior a 0,8 g (Cuadro 6). Tabla 6 Peso de 1000 semillas de muestras de semillas de Bupleurum chinensee Muestra No. Peso de mil semillas (g) Muestra No.
T/SXZYC 001-2023 Historia
2023T/SXZYC 001-2023 Norma de calidad de semillas de Bupleurum chinensis